[发明专利]一种检测孔雀石绿的分子印迹聚合物微球

说明书

技术领域

本发明涉及一种分子印迹检测技术，具体地，涉及一种利用分子印迹技术的快速检测水产品中孔雀石绿的方法，本发明还涉及用于该检测方法的分子印迹聚合物微球。

背景技术

众所周知，孔雀石绿在水产养殖中抗菌效果较好，价格低廉，目前对其危害性的宣传力度较弱，从而使得被不少水产养殖业户广泛使用。基于此，我国制定了《无公害食品水产品中渔药残留限量(NY5070-2002)》标准，其中规定水产品中不得检出孔雀石绿等危害性物质。

《2000年度中国出口动物源性食品中有毒有害物质残留监控计划》首次将出口鳗鱼中孔雀石绿残留量的监控列入年度计划，并延续至今。2002年5月欧盟曾向我国通报在2批浙江舟山向德国出口的鳗鱼中检出孔雀石绿。2005年6月5日，英国食品标准局在英国一家知名的超市连锁店出售的鲑鱼体内发现一种名为“孔雀石绿”的成分，有关方面将此事迅速通报给欧洲国家所有的食品安全机构，发出了食品安全警报。英国食品标准局发布消息说，任何鱼类都不允许含有孔雀石绿，并且这种化学物质不应该出现在任何食品中。2005年7月7日农业部办公厅发布了《关于组织查处“孔雀石绿”等禁用兽药的紧急通知》，要求各地尽快组织开展孔雀石绿等禁用药物的专项整治工作。农业部渔业局马上组织调查组奔赴各地调查孔雀石绿问题，并组织专家商讨对策。2005年以来欧盟、日本、韩国等国加大了对我国出口鳗鱼中孔雀石绿的检验力度。日本从2005年7月1日起，开始对来自我国的鳗鱼产品强制检测孔雀石绿。同时，香港、新加坡等地也加强了水产品检验，检出多批大陆水产品中含有孔雀石绿残留。

孔雀石绿别名：碱性绿、盐基块绿、孔雀绿，其分子式为C23H25ClN2，分子量为364.92，属于三苯甲烷类染料，是一分子苯甲醛与两分子二甲基苯胺在浓硫酸或氯化锌存在的条件下聚合而形成的深绿色晶体，具有金属光泽。孔雀石绿极易溶于水，水溶液呈兰绿色(4.0g/100ml)，也能溶于乙醇、甲醇或戌醇。孔雀石绿在细胞分裂时，抑制细胞内的谷氨酸转变为肽类及相关产物，从而抑制细胞分裂，达到抗菌效果(HECHT T等.J Appl Ichth，1998，14(3-4)：213-221.)。

孔雀石绿有强烈的致癌作用，由于其为脂溶性化合物，在鱼体内和环境中残留时间长，且代谢缓慢，在人体残留时间长，对人体的危害是积蓄式的(刘峰延等.中国水产，2006(1)：58-59.)。有时虽然摄入量不多，不会有很明显的中毒症状，但当体内的孔雀石绿堆积到一定程度，就可能引发各种疾病。

孔雀石绿及其代谢产物无色孔雀石绿具有高残留性、高致癌性、高致畸性、致突变性、高毒性等特性。研究发现孔雀石绿能导致大鼠肝细胞空泡化，使甲状腺滤泡上皮大量凋亡，抑制雄鼠甲状腺激素的释放；抑制血浆胆碱脂酶的作用，进而造成乙酰胆碱的蓄积有出现神经症状的可能性(MUSAS O等.J Aquat Sci，1999，14：37-42.)。此外，它还能通过溶解足够的锌(Srivastava S等.Aquat Toxicol，2004，66：319-3291；SVOBODOVA Z等.Acta Vet Brno，1997，66(2)：111-116)，导致水生动物急性锌中毒，引起水生生物消化道、鳃和皮肤轻度炎症，从而影响其正常摄食和生长，还可阻碍肠道酶(如胰蛋白酶、α-淀粉酶)的活性，影响水生动物的消化吸收功能(SRIVASTAVA K等.ActaHydrobiol，1995，37(2)：113-119；SRIVASTAVAS J等.J Adv Zool，1998，19(1)：46-49)。

目前检测孔雀石绿方法包括同时检测孔雀石绿和无色孔雀石绿残留《无公害食品水产品中孔雀石绿残留量的测定液相色谱法》(SC/T3021-2004)标准。2005年9月5日中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局和国家标准化管理委员会发布《水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定》，规定将高效液相色谱和液相色谱-串联质谱作为孔雀石绿检测的国标方法。国外还采用气相色谱-质谱联用法、薄层色谱法和毛细管电泳法等进行孔雀石绿的检测(Turnipseed S B等.J AOACInt，1995，78(4)：971-977；Matysik FM.1998，802(2)：349；Tarbin J A等.Jthe analyst Int，1998，123(12)：2567-2571)。但这些检测方法都要依赖复杂精密仪器，对样品分离净化的步骤也相对繁琐。