[发明专利]一种溶栓/抑制血小板凝集双功能分子及其用途

说明书

                        技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种溶栓/抑制血小板凝集双功能分子及用途，具体的说，涉及一种溶栓/抑制血小板凝集双功能分子及其用途，该溶栓/抑制血小板凝集双功能分子具有在制备抑制血小板凝集、溶栓药物中的应用。

                        背景技术

Fibrolase是来自美国南方铜头蝮蛇(Agkistrodon contortrixcontortrix)的一种锌金属蛋白酶，具有纤溶活性，无出血活性。是一条由203个氨基酸残基组成的多肽链，分子量为23kD，N-端为环化的谷丙酰胺残基。1mol Fibrolase蛋白中结合1mol锌原子，失去锌将会导致其快速失活(Ahmed NK，et al.Haemostasis.1990，20(3)：147-154)。

Fibrolase能特异性的降解纤维蛋白原纤维蛋白(原)，使之成为45kDa和22.5kDa碎片。研究表明，Fibrolase的溶栓机制与现在临床上应用的溶剂t-PA和链激酶等完全不同，它直接作用于血栓，专一地裂解纤维蛋白(原)Aα-链的lys⁴¹³-leu⁴¹⁴键，因此也不受丝氨酸蛋白酶的抑制(Ahmed NK，etal.Haemostasis，1990，20(6)：334-340)。决定其裂解位点的是序列决定性，而非键决定性，至少与lys⁴¹³-leu⁴¹⁴周围的八个氨基酸顺序有关。另外Fibrolase对纤溶酶原无活化作用，也不水解其它凝血因子及血小板膜。所以Fibrolase是一种比血纤溶酶底物特异性更专一的纤溶酶。

Fibrolase无论在体内还是体外，均能直接溶解纤维蛋白凝块。Guan等应用动物静脉血栓模型对Fibrolase的溶栓活力进行了研究，注射Fibrolase的6只兔子髂静脉中的48h老龄血块全部被溶解，动物全部存活，副反应很少(Guan AL，et al.Arch Biochem Biophys，1991，289(2)：197-207)。

在凝血过程中，血小板粘附和聚集是一个重要步骤，而含RGD序列的整合素受体配基(纤维蛋白原)同其受体(GPIIbIIIa)的作用，又是血小板粘附所必不可少，而纤维蛋白原通过其γ链C端的RGD序列与GPIIbIIIa等受体相互识别并发挥其功能的。在发现具有RGD序列的去整合素能与血小板糖蛋白GPIIbIIIa结合、有效抑制血小板聚集后，为了更好的研究RGD序列的活性构象，人们合成了各种的含RGD序列的小肽，如RGDS、RGDW、GRGDS等。它们均具有抑制纤维蛋白原与血小板的结合和抑制血栓形成等作用。但其抑制活性比含同样序列的天然蛋白要低的多，且半衰期较短。随后又有各种环化的RGD肽被相继合成，通过不同形式的环化后，可以提高其抑制活性。这可能是由于线状肽中的天冬氨酸(Asp)容易被降解，而环化肽的刚性保证了天冬氨酸(Asp)的稳定性；环化可以束缚含RGD序列的片段，以形成局域构象，同时RGD残基形成一个突出的环状loop，这使它能够更容易插入到整合素GPIIbIIIa，所以具有比较强的抑制血小板聚集作用。