[发明专利]显示MCSP的表面表达的细胞的细胞毒性介导

说明书

技术领域

本发明涉及癌性疾病的诊断和治疗，具体涉及肿瘤细胞的细胞毒性的介导；最具体地涉及使用癌性疾病调节抗体(CDMAB)，可选地与一种或多种化疗剂组合，作为手段来引发细胞毒性反应。本发明进一步涉及使用本发明的CDMAB的结合测定。

背景技术

黑色素瘤相关硫酸软骨素蛋白聚糖(MSCP)是由开发了针对人类转移黑色素瘤细胞系的单克隆抗体的数位研究者各自独立地鉴定的。有数种抗体被发现与黑色素瘤细胞表面相关的特定抗体反应。由于这些抗体是相互独立地开发的，造成目标抗原的名称多种多样，后来所有这些名称都被确定为MCSP。因此，MCSP又被称为高分子量黑色素瘤相关抗原(HMW-MAA)，人黑色素瘤蛋白聚糖(HMP)，黑色素瘤-相关蛋白聚糖抗体(MPG)和黑色素瘤硫酸软骨素蛋白聚糖(mel-CSPG)，而且还被鉴定为多种特异性抗体的抗原，这些抗体中的一些已在下文中列出。还发现MCSP与大鼠蛋白聚糖NG2有超过80％的同源性，因此也被称作该名字。

MCSP是糖蛋白-蛋白聚糖复合物，由250kDa的N-联糖蛋白和＞450kDa的蛋白聚糖组分构成。核心糖蛋白存在于黑色素瘤细胞表面，或者作为游离的糖蛋白，或者作为附加了硫酸软骨素的修饰的糖蛋白。通过MSCP的分子克隆鉴定了数种结构特征。存在3个胞外域，其总共含有10个半胱氨酸(5个可能的二硫桥)，15个可能的N-联糖基化位点，和11个可能的硫酸软骨素附着位点。跨膜片段具有一个单独的半胱氨酸，但该残基功能上的重要性还没有得到证明。胞质域具有3个苏氨酸残基，它们可能充当蛋白激酶C的磷酸化位点，尽管目前尚未显示MCSP是磷酸化的。

已经证实MCSP在大多数黑色素瘤癌中表达，而且原本认为其在正常细胞和其他种类的肿瘤中的分布非常有限。导致这一结论的一项早期的研究对用甲醛或甲醇固定的组织进行免疫组化(IHC)以确定MCSP的分布，其使用了抗MCSP抗体B5。在这项研究中，发现抗体B5与22种被测试的黑色素瘤中的17种反应，与2种星细胞瘤中的2种反应，而不与23种癌中的任何一种反应。在22种被测试的正常组织中，发现B5只与皮肤角质形成细胞、肺泡上皮和毛细血管内皮结合。

另外一项研究考察了MSCP的组织分布，其是使用冷冻组织切片由抗MCSP抗体9.2.27来确定的。仍然，在所有被测试的黑色素瘤组织和细胞系中都发现了反应性，但6种不同癌中的任一种中都没有发现反应性。在被测试的7种胎儿组织中，只有皮肤中观察到反应性，主动脉中观察到微弱的反应性，而在成人组织中，在被测的13种组织中只有3种观察到了反应性。

接下来的一项研究使用抗MCSP抗体B5，9.2.27，225.28S和A0122考察了MCSP的分布，所有这些抗体都识别MCSP的独特表位。这项研究是对冷冻组织进行的。发现所有的抗MCSP抗体都有相似的染色图案，它们与正常的和恶性的、来源于神经、间质和上皮的肿瘤发生反应，这些肿瘤先前被认为是MSCP阴性的。具体地，抗体B5与24种被测器官中的多种上皮、结缔、神经和肌肉组织发生反应，并且与34种不同的肿瘤中的28种发生反应。作者解释说，他们的发现与先前的报道的不同，是由于使用了改良的、稳定性更好的IHC技术；并指出固定剂的选择是重要的，可能导致这样的结论，即MSCP抗原的一个重要特征是其对IHC中所涉及的处理步骤的敏感性。

进行了一项进一步的研究以在超微结构水平上定位MCSP。使用电子显微术的免疫定位显示，MSCP几乎专一地定位于微端丝(microspikes)，这是黑色素瘤细胞表面的一个微域，可能在细胞-细胞接触和细胞-基质粘附(cell-substratum adhesion)中起作用。

1996年MCSP的分子克隆使得利用MCSP cDNA探针对肿瘤细胞系和正常人类组织的MCSP表达进行Northern印迹分析成为可能。在被测试的8种不同的肿瘤细胞系中，只有在黑色素瘤细胞系中观察到了MCSP表达。在被测试的16种正常成人组织和4种正常胎儿组织中，没有任何一种观察到MCSP表达。不同的MCSP组织定位研究中发现的不一致之处，提示可能需要进一步的研究，来阐明这种抗原的真实表达模式或者解释这些已报道的不同。