[发明专利]显色剂的液体试剂及其稳定化方法

说明书

技术领域

本发明涉及亚甲蓝系显色剂的液体试剂及其稳定化方法。

背景技术

作为被氧化而显色的底物，例如已知有10-(羧甲基氨基羰基)-3，7- 双(二甲基氨基)吩噻嗪等亚甲蓝系显色剂。该亚甲蓝系显色剂由于作为 显色团的亚甲蓝难以退色，因此能够进行高灵敏度的检测，期待在各种分 析中的使用。

这种显色剂例如可以用于下述情况：使其与通过氧化还原酶生成的过 氧化氢等氧化物质发生反应，通过对其发色量进行吸光度测定，从而确定 上述氧化物质的量。供于这种酶反应时，显色剂通常溶解在水中，将所制 备的溶液作为液体试剂来使用。

但是，由于这种亚甲蓝系显色剂在水等溶剂中不稳定，因此具有自然 发色的问题。因此，当使用以液体状态保存的显色剂时，吸光度测定的背 景提高，测定精度有可能降低。特别是，亚甲蓝系显色剂的作为发色团的 亚甲蓝如上所述具有难以退色的性质，因此即便具有高灵敏度的优点，但 与其它发色团相比，由于自然氧化而游离的发色团(亚甲蓝)也难以退色， 因此存在难以回避其影响的问题。例如，10-(羧甲基氨基羰基)-3，7-双(二 甲基氨基)吩噻嗪以水溶液的状态保存时，在约1天左右可见影响测定的 自然发色，约3天左右作为分析用试剂的使用变得困难(参照专利文献1 或该专利文献1的对应美国专利US4,916,058)。

为了防止这种自然发色所造成的影响，有必要在每次测定时制备液体 试剂，但这样操作变得繁杂、成本也提高。

专利文献1：日本特公平4-27839号公报

发明内容

因此，本发明的目的在于提供即便在液体状态下也可以稳定地保存的 亚甲蓝系显色剂的液体试剂以及在溶剂中将上述显色剂稳定化的方法。

为了达成上述目的，本发明的液体试剂含有亚甲蓝系显色剂、具有碳 原子数为12以上的烃链的季铵或其盐以及液体介质。

另外，本发明的含有亚甲蓝系显色剂的液体试剂的稳定化方法包括在 液体介质中使上述显色剂与具有碳原子数为12以上的烃链的季铵或其盐共 存。

这样，在含有亚甲蓝系显色剂的液体试剂中，通过使具有碳原子数为 12以上的烃链的季铵或其盐(以下也统称为“季铵”)共存，虽然机理不明， 但可以抑制亚甲蓝显色剂的自然发色。由此，上述显色剂可以在液体状态 下保存，例如不必在每次测定时制备显色剂的液体试剂，因此测定等操作 变得容易，低成本化也成为可能。而且，即便使用保存的本发明的显色剂 的液体试剂作为显色反应的显色试剂，由于可以抑制吸光度测定中的背景 提高，因此测定精确度也可以提高。

具体实施方式

本发明的亚甲蓝系显色剂的液体试剂如上所述，其特征在于至少含有 亚甲蓝显色剂，并含有具有碳原子数为12以上的烃链的季铵或其盐以及液 体介质。

这种本发明的液体试剂通过亚甲蓝系显色剂与上述季铵的共存，抑制 了自然发色而被稳定化，因此可以在液体状态下保存。其保存温度并无特 别限定，例如为0～40℃的范围、优选为0～25℃的范围、更优选为0～10℃ 的范围。

具体地说，当未在亚甲蓝系显色剂的液体试剂中添加季铵时，如果在 10℃下保存，则例如在亚甲蓝系显色剂的浓度为0.05mmol/L时，亚甲蓝在 吸收波长658nm下的吸光度在保存10天时例如增加至180mAbs.。与此相 对，本发明的液体试剂即便在10℃下保存，即便至少保存3天、例如保存 4、5、6、7、8、9、10天时，也可以防止和/或抑制亚甲蓝系显色剂的自然 发色，20～300天左右时也可作为显色剂的试剂充分地使用。

作为本发明的亚甲蓝系显色剂的液体试剂的用途，并无特别限定，例 如如上所述可作为氧化还原反应中的显色底物等的液体试剂来使用。