[发明专利]由抗毛线虫抗体识别的多肽及其应用

说明书

本发明涉及毛线虫属(Trichinella)寄生虫中所鉴定出的新抗原在诊断和 预防旋毛虫病中的应用。

旋毛虫病是与食用了毛线虫属寄生虫侵染(infestée)的肉相关的人畜 共患病(MURRELL等，2000)。

有腺纲(Adenophorea)的线虫属于毛线虫科(Trichinellidae)，其包括8 个种和3个相关基因型，可分成2个不同系统发生组：一为有包膜的毛线 虫(旋毛形线虫(T.spiralis)；本地毛形线虫(T.nativa)；布氏线虫(T.britovi)； 米氏旋毛虫(T.murrelli)；纳氏旋毛虫(T.nelsoni))，其侵染(infestent)哺乳 动物，另一为无包膜的毛线虫(假旋毛形线虫(T.pseudospiralis)；巴布亚线 虫(T.papuae)；津巴布韦线虫(T.zimbabwensis))，其侵染哺乳动物、鸟和爬 行动物(GASSER等，2004)。所有这些种都侵染(infester)人。

所述寄生虫的生物循环是自异宿主的：它全部都发生在同一宿主中， 该宿主接着会是最后宿主(带有成体寄生虫)和中间宿主(带有侵染性幼 虫)(BOIREAU等，2002)。为了进行新的循环，必须使侵染性幼虫从宿主 转移到另一个。该转移通过摄食生的或刚烹调过的污染有幼虫的肉而发生。 摄食时，释放出后者并穿过肠上皮，其中它们将成熟成有性成体(Ad)蠕 虫。然后，受孕的雌体排出新生的L1幼虫(L1NN)，其通过淋巴循环和血 流到达横纹肌。这些L1NN幼虫穿过肌细胞(侵染发展阶段L1M：L1肌肉 幼虫)，在此它们分化成由保护性胶原膜(capsule)包围的饲养细胞(cellules nourricières)，对于有包膜的毛线虫，所述膜是厚的，对于“无包膜”的毛线 虫，所述膜是非常薄的。

尽管旋毛虫病在动物中是无症状的，但在最初的肠阶段，与恶心、呕 吐和剧烈腹痛相关的腹泻反应了人侵染，肌肉侵入阶段相关症状特征在于 发烧、面部水肿和肌痛的并发(CAPO&DESPOMMIER，1996)。此旋毛 虫病的临床景象中还可以加上眼睛、肺、胃肠、心脏和神经攻击，其进程 可能是致命的。特征为患者持续肌肉疼的慢性侵染与寄生虫在饲养细胞中 的存活有关。

如果能早期诊断侵染以采取针对所有寄生阶段(尤其是包围L1M幼虫 的保护性胶原膜形成前)的行动，则特定的用驱肠虫药对人旋毛虫病的治 疗将更有效(FOURESTIE等，1988)。

流行病学数据证明了该寄生虫于世界所有部分的地理分布，其与涉及 了还保持了主要以猪为代表的家畜侵染循环的野生动物群的许多物种的传 播方法有关(DUPOUY-CAMET，2000)。

由于饮食习惯和不总是有效的卫生控制，人旋毛虫病流行病(突发或 复发性人畜共患病)构成了全世界的现实公共卫生问题(MURRELL& POZIO，2000)。这些流行病基本涉及猪和野猪肉以及马肉(BOIREAU等， 2000)。

因此防止人污染涉及正确烹调肉和改善饲养条件和/或控制动物旋毛虫 病(猪、马、野马和其它对毛线虫敏感的野生动物)的条件(BOIREAU等， 2002)。

用于旋毛虫病的筛选技术分成两类：1)通过毛线虫镜(trichinoscopie) (显微观察肉片)或在人工消化肌肉样品后直接检测L1幼虫，和2)通过各 种免疫方法间接检测，用于检测抗毛线虫属抗原的抗体。

寄生虫的每个发育阶段：成体(Ad)、新生幼虫(L1NN)和肌肉幼虫 (L1M)有相应的特异抗原谱。

源于L1M阶段幼虫的抗原制品目前用于免疫诊断。这是因为两个早期 阶段Ad和L1NN的抗原级分难于纯化，而且至今不可能鉴定出与这两个阶 段的一个和/或另一个相关的免疫优势抗原。

原则上使用的总可溶性抗原制品通过裂解幼虫、离心裂解物并回收上 清或更常见地通过排泄/分泌抗原(E/S抗原)来获得。

在存活状态下将L1M幼虫置于培养基，这时来产生排泄-分泌抗原；它 们源于被称为杆状体的特定器官，杆状体包含约50个盘形细胞杆细胞。杆 细胞含颗粒，其内容物通过小管流入寄生虫食道内腔。该内容物有非常高 的抗原性，构成排泄-分泌抗原部分。这些抗原形成复杂蛋白混合物，其尤 其含一组糖蛋白(称为TSL1抗原)，其带有特定碳水化合物分子(β-泰威 糖)，其已知仅在毛线虫属中，而且存在于所有该寄生虫的物种中。