[发明专利]恙虫病诊断制剂

说明书

技术领域

本发明涉及恙虫病的诊断试剂盒，其中使用东方恙虫(Orientia tsutsugamushi)的混合抗体检测生物样品中的抗东方恙虫抗体。

背景技术

恙虫病是由东方恙虫引起的一种急性发热疾病，东方恙虫属于立克次 氏体科(Rickettsiaceae)恙虫病属(scrub typhus)，并通过幼虫期恙螨(trombiculid mite)的叮咬传播。诸如发冷、发烧和头疼的症状在被幼虫期恙螨叮咬后大约10 天(1到3周)发生，并且皮疹在症状发生后约一周开始出现在人体躯干上，随后 呈离心状扩散到四肢。水泡在幼虫期恙螨的叮咬部位出现，随后是大小为0.5到 0.8cm的溃疡的形成。溃疡被黑色的痂覆盖，其称为焦痂。一些患者会发生呼吸道 症状，其中胸部X光检查显示患者中大约一半出现肺浸润(pulmonary infiltration)。 在一些严重的病例中，中枢神经系统可能被感染，导致失去知觉或死亡。

恙虫病在世界范围内发生，但是在亚洲，包括日本、中国、马来西亚、 泰国、越南等地特别普遍(《韩国的恙虫病(Tsutsugamushi disease in Korea)》， WooHyun Jang编辑，Seoheung Co.出版，第21-27页，1994)。该疾病在10月发生 最频繁，通常在秋季，9月到12月早期(Kim等，Infection 20；105-116，1988)。 在野外工作或野营的人可能有患恙虫病的风险。

东方恙虫的致病性是由于攻击血管内皮细胞产生的系统性血管炎 (systemic vasculitis)引起的。侵入血液后，东方恙虫在血管内皮细胞中复制，引 起血管损伤，或微血管血栓和血管周围的炎症。因此，该疾病在组织病理学上的 特征为多种器官的血管被损伤，其可以引起皮肤坏死、皮疹、脑膜炎、脱发、心 肌炎和心力衰竭。而且，已经报道了由于血管内凝结引起的低纤维蛋白原血症 (hypofibrinogenemia)的病例。在一些情况下，该疾病的症状或传染病学特征根 据东方恙虫的每个血清变型而不同。属于相同血清型的恙虫菌彼此在血清学上相 关，并且在属于不同血清型的细菌之间没有或仅有很弱的血清学交叉反应性。东 方恙虫被分类为一个种。然而，存在许多有不同抗原性的血清型，并且根据抗原 性，它们被分类为各种血清型，诸如Gilliam、Karp和Kato菌株。在韩国的传染 性菌株中，已经分离出了具有与已知传染性原型菌株(epidemic prototype strain) Gilliam和Karp不同血清学反应性的Kangwon和Boryong。

这样的血清型多样性取决于东方恙虫的膜蛋白抗原，如种特异抗原 (species-specific antigen)和血清型特异抗原(serotype-specific antigen)。抗原从 东方恙虫中纯化，并随后用聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹法分析。结果，发现 大小为70kDa、60kDa、54到56kDa和46到47kDa的主要抗原存在(Takahashi K 等，Microbiol.Immunol.29：475，1985)，大小为46到47kDa、54到56kDa和70kDa 的每种抗原都具有很强的抗原性，并且大小为70kDa和46到47kDa的每种抗原都 是菌株特异性抗原(strain-specific antigen)(Tamura A等，Microbiol.Immunol. 26：321，1982)。

普遍认为恙虫病不显示严重的临床症状，并且临床诊断很容易从典型 的症状和标志上辨识出。然而，非典型症状和标志已经在很多病例中有报道。因 此，在恙虫病的特定症状，如系统性淋巴增生和焦痂形成没有观察到的病例中， 难以区分恙虫病与其它急性发热疾病，如细螺旋体病、鼠型斑疹伤寒和带有肾综 合症的出血热。

有一些通过使用培养物分离病原体或使用免疫荧光测试鉴定抗体来 诊断恙虫病的精确方法。然而在使用免疫荧光测试的诊断方法中，需要细胞培养 以获得立克次氏体抗原，而且长时间储存这些抗原是困难的。诊断也需要荧光显 微镜，该诊断仅能在拥有荧光显微镜的实验室中进行。因此，对患者可能经常发 生的农村地区的医院来说进行免疫荧光测试是困难的。

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