[发明专利]通过DNA标签的生物的鉴定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种使用DNA标签的生物的鉴定方法，更具体地，涉及通过特定的碱基序列的检测，鉴定个体、种、栖息地等的方法。更具体地，涉及预先将特定的碱基序列有意地添加给检查对象，然后通过检测该序列，鉴定个体、种、栖息地等的方法。由于生物具有的DNA的碱基序列根据个体、种、栖息地等而不同，通过利用本发明的鉴定方法，可以判别生物的个体、种、栖息地等。而且，最近，食品带有附加说明的封印的伪装，以及向食品混入基因重组体等已成为社会问题，本发明的鉴定方法就可以应用于这些伪装和混入的判定等。

背景技术

近年来，从食品的放心和安全的观点看来，农产物的产地判定和品种鉴别等的鉴定的必要性日益增加，但很多情况下仅依据外观无法鉴定产地和品种，无法得出鉴定结果，因此最近，采用DNA的鉴定方法开始被应用(例如参考非专利文献1)。

现在，为了使用DNA进行产地和品种的鉴别，需要在各产地和品种中预先检索并确定碱基序列不同的DNA的部位，在实际的产地和品种的鉴别时，用碱基序列分析和PCR-RFLP等方法分析作为检查对象的生物的DNA的该部位的碱基序列，判断获得的碱基序列与哪个产地或品种的相同。迄今为止，为了确定这种鉴定中使用的DNA的部位，一直在鉴定对象的生物原本具有的DNA中，寻找具有与其它生物不同的碱基序列的部位(例如参考专利文献1、2)。具体地，例如，为了确定草莓的品种鉴别中使用的DNA部位，首先，大量收集例如名为“丰香(とよのか)”的同一品种的草莓，分别从其中提取DNA，用多种限制性酶分别切割各DNA后，分别进行电泳，获得切割模式。然后，大量收集希望与“丰香”相辨别的名为“栃乙女(とちおとめ)”品种的草莓，从其中分别提取DNA，用多种限制性酶分别切割各DNA后，分别进行电泳，获得切割模式。然后，将“丰香”和“栃乙女”的各个限制性酶的切割模式互相比较，探寻“丰香”和“栃乙女”的切割模式的差异。用相同限制性酶呈现不同的切割模式，是因为可以用限制性酶切割的碱基序列的某些部位在“丰香”和“栃乙女”中并不相同。因此，将呈现出这种不同的切割模式的DNA的部位确定为用于判别“丰香”和“栃乙女”的部位。因此，现在，为了确定用于判别产地和品种的DNA的部位，需要花费大量时间、费用、劳动力。实际判别产地和品种时，将从作为检查对象的生物中提取的DNA，用在“丰香”和“栃乙女”中呈现不同的切割模式的限制性酶切割后，进行电泳，判断获得的切割模式呈现的是“丰香”和“栃乙女”中的哪一种图谱，鉴定检查对象生物是“丰香”还是“栃乙女”。因此，实际的产地和品种的鉴定的方法，使用的是与最初的确定用于判别“丰香”和“栃乙女”的部位的方法相同的方法。

另一方面，现在，在试验性进行的利用基因重组的基因治疗和品种改良中，正在开发在对象中导入发挥有益功能的基因和基因表达单元，使之稳定保持，并且检测这些基因或基因表达单元保持在对象中的各种方法，并使之实用化(例如非专利文献2～4)。

专利文献1:专利公开2002-112774

专利文献2:专利公开2004-344004

非专利文献1:2006年7月21日农林水产部新闻发布，关于2005年产米农产物检查的通过DNA分析获得的品种判别调查结果<http://www.maff.go.jp/www/press/2006/20060721press_3.pdf>

非专利文献2:Sambrook J和Russell DW:第16章将克隆的基因导入培养的哺乳动物细胞(Introducing Cloned Genes into CulturedMammalian Cells)，分子克隆:实验手册(Molecular Cloning:A laboratorymanual)，第三版，2001；第16.1-16.62页。

非专利文献3:Sambrook J和Russell DW，方法:介绍DNA杂交(方法8-10)(Protocol:Introduction to Southern hybridization(Protocols8-10))，在:第6章制备和分析真核基因组DNA(Chapter 6 Preparationand analysis of eukaryotic genomic DNA)，分子克隆:实验手册(MolecularCloning:A laboratory manual)，第三版，2001；第6.33-6.38页。