[发明专利]产生转基因禾本科细胞和植物的方法

权利要求书

1.一种产生转基因禾本科植物细胞的方法，所述方法包括：

(i)从成熟禾本科籽粒获得胚细胞；和

(ii)用能够转化植物细胞的细菌接触所述胚细胞，所述细菌包括待引 入到胚细胞内的转移核酸，所述接触在足以使得所述细菌将所述转移核酸引 入到一个或多个细胞内的条件下进行一段时间，

由此产生转基因禾本科植物细胞。

2.权利要求1的方法，包括从成熟籽粒获得胚细胞以及用包括核酸构 建体的细菌接触胚细胞，而无需首先从所述胚细胞诱导愈伤组织形成。

3.权利要求1的方法，包括在不足以使得从所述胚细胞形成愈伤组织 的条件下用所述细菌接触胚细胞一段时间。

4.权利要求1到3中任一项的方法，其中在从成熟籽粒获得所述胚细 胞的3天内，用所述细菌接触胚细胞。

5.权利要求1到4中任一项的方法，其中足以使得细菌将核酸构建体 引入到胚细胞的细胞内的条件包括通过实施如下方法而用所述细菌接种胚 细胞，所述方法包括在足以使得所述细菌结合或附着于所述胚细胞的条件下 用细菌接触胚细胞一段时间。

6.权利要求1到5中任一项的方法，其中足以使得细菌将核酸构建体 引入到胚细胞的细胞内的条件包括通过实施如下方法而共培养胚细胞和细 菌，所述方法包括在足以使得所述细菌将核酸构建体引入到胚细胞的细胞内 的条件下维持胚细胞和细菌一段时间。

7.权利要求1到6中任一项的方法，其中足以使得细菌将核酸构建体 引入到胚细胞的细胞内的条件包括在存在细菌氮源的情况下维持胚细胞和 细菌。

8.权利要求7的方法，其中细菌氮源是植物或动物蛋白提取物的酶消 化物或者是对植物或动物提取物进行部分水解产生的水溶性部分。

9.权利要求8的方法，其中细菌氮源来自大豆。

10.权利要求1到9中任一项的方法，还包括在用细菌接触所述组织之 前从胚细胞去除种皮和/或糊粉。

11.权利要求1的方法，其中禾本科植物细胞是小麦细胞或大麦细胞或 稻细胞或玉米细胞。

12.权利要求11的方法，其中禾本科植物细胞是小麦细胞，且成熟小 麦籽粒具有以下一个或多个特征：

(i)存在检测不到分裂的胚乳细胞；和/或

(ii)已经停止核内复制的胚乳细胞；和/或

(iii)具有低含水量胚乳的胚乳细胞。

13.权利要求12的方法，其中成熟小麦籽粒的龄期为开花期后至少30 天。

14.权利要求11的方法，其中禾本科植物细胞是大麦细胞，且成熟小 麦籽粒具有以下一个或多个特征：

(i)存在检测不到分裂的胚乳细胞；和/或

(ii)具有低含水量胚乳的胚乳细胞；和/或

(iii)粒含水量不超过约40％。

15.权利要求14的方法，其中成熟大麦籽粒的龄期为开花期后至少30 天。

16.权利要求11的方法，其中禾本科植物细胞是稻细胞，且成熟小麦 籽粒具有以下一个或多个特征：

(i)圆锥花序或籽粒的颜色为黄色；和/或

(ii)具有低含水量胚乳的胚乳细胞。

17.权利要求16的方法，其中成熟稻籽粒的龄期为开花期后至少25天。

18.权利要求11的方法，其中禾本科植物细胞是玉米细胞，且成熟小 麦籽粒具有以下一个或多个特征：

(i)存在检测不到分裂的胚乳细胞；和/或

(ii)在玉米籽粒或种子或粒内形成黑色细胞层；和/或

(iii)粒含水量不超过约35％。

19.权利要求18的方法，其中成熟玉米籽粒的龄期为开花期后至少35 天。

20.权利要求1的方法，其中细菌是土壤杆菌(Agrobacterium)。