[发明专利]在用人胎儿肝干细胞注射的免疫缺陷动物中产生抗体的方法

说明书

本发明涉及产生抗体的方法、抗体生成细胞的组合物、它们的生产方 法及其用途。

发明背景

长期以来认为单克隆抗体(MAB)是癌症的免疫疗法、感染或自身免疫 病等的妙方。然而，由于人抗小鼠的免疫应答，人类中使用的第一代鼠抗 体很不成功。

人抗体大部分来自携带有受限的一组人类Ig基因的转基因小鼠或使 用噬菌体展示、酵母展示或类似重组技术选自多数人工抗体库。这些策略 已经被设计用来消除针对人类背景中的单克隆抗体的任何免疫反应。人抗 体可以在转基因动物(例如小鼠)中产生，所述转基因动物经免疫后能够在 没有内源性免疫球蛋白产生的情况下产生人抗体。在此类种系转基因小鼠 中转移人类种系免疫球蛋白基因阵列导致抗原攻击时产生人抗体(见，例 如，van Dijk，M.A.和van de Winkel，J.G.，Curr.Opin.Chem.Biol.5(2001) 368-374；Jakobovits，A.，等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90(1993) 2551-2555；Jakobovits，A.，等人，Nature 362(1993)255-258；Bruggemann， M.，等人，Year Immunol.7(1993)33-40)。人抗体也可在噬菌体展示文库中 产生(Hoogenboom，H.R.和Winter，G.，J.Mol.Biol.227(1992)381-388； Marks，J.D.，等人，J.Mol.Biol.222(1991)581-597)。Cole等人和Boerner 等人的技术也适用于人单克隆抗体的制备(Cole等人，Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy，Alan R.Liss，p.77(1985)；和Boerner，P.， 等人，J.Immunol.147(1991)86-95)。然而此类转基因小鼠只能提供具有受 限的一组人类Ig基因的抗体-由转染的免疫球蛋白基因阵列引起的那些。

基于对人类免疫球蛋白基因转基因的小鼠的方法学已经允许产生来自 人类种系序列的抗体，根据报道所述抗体与鼠类的或小鼠-人嵌合抗体相比 已经降低所获抗体药物的免疫原性。然而，来自转基因小鼠的人抗体与天 然人类免疫所有组成成分相比在它们的多样性、亲和力及特异性上有限。

类似地，基于噬菌体或酵母展示的组合文库方法的主要缺点是抗体重 链和轻链的随机配对。为鉴定具有高亲和力的重链和轻链对，原始抗体重 链和轻链对——非同源对的解离需要筛选多数克隆。此外，此类非同源对 可能呈现与人类自身抗原不想要的交叉反应性。最后，由于固有的选择偏 倚，通过组合文库的选择和筛选鉴定的靶特异性抗体的遗传多样性通常受 限。

Traggai，E.等人，Science 304 (2004) 104-107描述了在移植了人类脐 血细胞的Rag 2-/-γc-/-小鼠中开发人类免疫系统的方法，其可用作评估对疫 苗或活体感染性病原体的应答和靶定人类免疫系统的药学化合物的临床前 模型。已表明重建并随后接种病原体的小鼠可产生低水平的破伤风类毒素 特异性抗体应答。

发明概述

本发明包含从免疫缺陷型非人类动物中产生人单克隆抗体的方法，所 述方法包括使新生免疫缺陷型非人类动物与人类胎儿肝干细胞(FL细胞)接 触来产生免疫移植的非人类动物(重建动物)，随后使所述重建动物与抗原 接触，从所述重建动物中收集产生针对所述抗原的人抗体的人细胞，并从 所述抗体产生细胞中分离所述抗体。

本发明优选包括本发明的方法，其特征在于通过转化方法或细胞融合 方法建立所述抗体产生细胞，优选无限增殖的抗体产生细胞。优选地所述 无限增殖细胞能够保持活力至少50代。

优选地，所述非人类动物是啮齿类动物并更优选为小鼠、大鼠或兔。 进一步优选所述小鼠是Rag2-/-γc-/-、裸Rag 2-/-、NOD(NOD指根据本发 明优选NOD.Cg-Rag1^tm1Mom Prf1^tm1Sdz/SzJ)或SCID米色小鼠并且大鼠是裸 大鼠。

本发明包括本发明的方法，其特征在于所述FL细胞是人类造血胎儿 肝干细胞(HFL细胞)，优选CD133+、CD117+、CD31+和/或CD34+。