[发明专利]用于蛋白质纯化的吸附剂

说明书

技术领域

本发明涉及化合物及其作为亲和配体用于蛋白质纯化的用途。

背景技术

抗体是具有基本单体结构单元的免疫球蛋白糖蛋白。所述单体是由 四条多肽链(其中两条是相同的重链，两条是相同的轻链，通过二硫桥 相连)组成的Y形蛋白质。存在五种不同类型的重链(γ、μ、α、ε和 δ)，它们可用于区分免疫球蛋白的种类(分别是IgG、IgM、IgA、IgD 和IgE)。还存在由不同基因产物所产生的两种不同类型的轻链(λ和K)。

IgG(大小约150kD的单体免疫球蛋白)提供了对抗入侵病原体的 基于抗体的免疫性，由于IgG在体内对特异性抗原具有高度特异性，因 此它是免疫学研究和临床诊断中最常用的试剂。

单克隆抗体(本文中称为Mab)是对单一抗原具有相同特异性的抗 体，其由单一克隆细胞所形成的细胞系所产生。Mab构成了生物药品产 业中增长最迅速的部分，估计到2010年其销售额将达到300亿美元(美 国)。在近20年来，来自哺乳动物细胞培养物的抗体效价持续增加，需 要可替代的下游技术和色谱吸附剂来解决Mab处理中的方法瓶颈。

抗体片段(整个抗体分子的部分)提供了优于整个抗体的几个优点。 它们更易于生产且更具成本效益，由于缺乏Fc(重链)区，它们通过 降低细胞因子释放的风险以及与之相关的毒性而在患者中具有较少的 副作用，可将其进行修饰以包含治疗性有效负载。存在几种类型的抗体 片段，其或者是通过特异性内肽酶的酶消化而制备的IgG结构域或者其 是在细胞系中通过基因工程而得到的。这些抗体片段包括单价片段如 Fab’、Fab和scFv；二价片段如F(ab’)₂二聚体抗体(diabody)和微型 抗体(minibody)；以及多价片段如三聚体抗体(triabody)和四聚体抗体 (tetrabody)。

有多种抗体片段产品正处在用作治疗剂或用于诊断的开发当中。预 计重组抗体片段每年将占据诊断市场(从体外免疫测定到体内肿瘤和凝 块成像应用)中60亿美元(美国)的重要份额(Holliger，P.，&Hudson P.J.，Nat.Biotech23(9；2005)1126-1136)。

大多数抗体片段产品缺乏蛋白A结合位点，因此与完整链的抗体不 同，其不能通过蛋白A亲和色谱进行纯化。在大多数情况下，常规色谱 技术用于纯化抗体片段。蛋白L是一种源自大消化链球菌 (Peptostreptococcus magnus)属细菌的分子量为35000道尔顿的蛋白 质，已知其与抗体轻链结合，并且已对其用于纯化一些抗体片段进行了 研究，但并不认为蛋白L是有成本效益的，且其不能以商业量而得到。

WO97/10887公开了可用作亲和吸附剂的式I的基于三嗪的化合物：

其中R₁是H、烷基、羟烷基、环己基、NH₂、苯基、萘基、1-苯基吡唑、 吲唑、苯并噻唑、苯并噁唑或苯并咪唑，其中任一所述芳族基团均可被 烷基、烷氧基、酰氧基、酰氨基、氨基、NH₂、OH、CO₂H、磺酰基、 氨基甲酰基、氨磺酰基(sulphamoyl)、烷基磺酰基和卤素中的一个或 多个所取代；

一个X是N，另一个X是N、C-Cl或C-CN；

Y是O、S或NR₂；

Z是O、S或NR₃；

R₂和R₃各自是H、烷基、羟烷基、苄基或β-苯基乙基；

Q是苯、萘、苯并噻唑、苯并噁唑、1-苯基吡唑、吲唑或苯并咪唑；

R₄、R₅和R₆各自是H、OH、烷基、烷氧基、氨基、NH₂、酰氧基、 酰基氨基、CO₂H、磺酸、氨基甲酰基、氨磺酰基、烷基磺酰基或卤素；

n是0～6；

p是0～20；和

A是任选地通过间隔基(spacer)连接到含有X的环上的载体基质。

公开了式I化合物对蛋白质(比如免疫球蛋白、胰岛素、VII因子 或人生长激素)具有亲和力。