[发明专利]包含天冬氨酸蛋白酶的液体组合物

说明书

发明内容

本发明涉及包含天冬氨酸蛋白酶的液体组合物。

众所周知，乳酪(cheese)的制备涉及天冬氨酸蛋白酶的使用。天冬 氨酸蛋白酶引起乳(milk)凝结，得到固体凝乳(curd)，该固体凝乳被 进一步加工为乳酪。

天冬氨酸蛋白酶可以从动物中回收，例如从牛、骆驼和海豹的胃中回 收。它们也可以由微生物(例如Rhizomucor，Cryphonectria)或宿主菌株 (例如Aspergillus或Kluyveromyces)生产。

在乳酪制造工业中，通常使用包含天冬氨酸蛋白酶的液体组合物。这 类液体组合物典型地含有某些添加剂，以获得想要的稳定性。人们能够区 别酶稳定性和微生物稳定性。酶稳定性是酶活性降低速率的度量。微生物 稳定性是组合物中微生物能够增殖和生长的度量。

组合物的微生物特征可以使用明确定义的标准步骤通过标准平板计 数、酵母数和霉菌数来表达。例如，标准平板计数可以是≤1ml中100 个，酵母计数可以是≤1ml中10个，霉菌计数可以是≤1ml中10个。因 为在使用前组合物通常被储存，所以期望平板计数、酵母数和霉菌数在延 长的周期中(例如在至少3个月的周期中)维持低于某界限值(例如上述 值)。

使用山梨酸盐或苯甲酸盐作为防腐剂来获得想要的微生物稳定性是公 知的。也可以使用对羟基苯甲酸酯(对羟基苯甲酸的烷基酯)。

例如，US-A-3763010公开了包含天冬氨酸蛋白酶、山梨酸钾和苯甲酸 钠的组合物。WO-A-9015865和WO-A-9529999公开了在含天冬氨酸蛋白 酶的组合物中使用苯甲酸钠。包含天冬氨酸蛋白酶和3g/l到5g/l之间 (0.02mol/l和0.035mol/l之间)苯甲酸钠的商业组合物是已知的。

然而，人们期望有不含或含少量山梨酸盐、苯甲酸盐和对羟基苯甲酸 酯的产品。

本发明的目的是提供下述组合物，所述组合物在无山梨酸盐、苯甲酸 盐和对羟基苯甲酸酯时具有良好的微生物稳定性。

本发明提供了具有惊人高的微生物稳定性的组合物，甚至在没有上述 这些化合物时或这些化合物以低于现有技术中已知的量存在时也是如此。 另外，该组合物可具有惊人高的酶稳定性。根据本发明的组合物可具有比 预期的更长的保质期。

根据本发明的第一方面，提供了包含(i)天冬氨酸蛋白酶；和(ii)无机盐 和/或多元醇的液体组合物，在该组合物中：

山梨酸盐、苯甲酸盐和对羟基苯甲酸烷基酯的总浓度小于0.010 mol/l；

标准平板计数≤1ml中100个；

酵母计数≤1ml中10个；和

霉菌计数≤1ml中10个。

应当理解山梨酸以及山梨酸的盐对山梨酸盐浓度作出贡献。苯甲酸以 及苯甲酸的盐对苯甲酸盐浓度作出贡献。对羟基苯甲酸烷基酯可以是盐的 形式，也可以不是盐的形式。因此，本文使用山梨酸盐、苯甲酸盐和对羟 基苯甲酸烷基酯的总浓度是指组合物中山梨酸、山梨酸盐、苯甲酸、苯甲 酸盐、对羟基苯甲酸烷基酯和对羟基苯甲酸烷基酯的盐的总浓度。山梨酸 盐的例子是山梨酸钠、山梨酸钾和山梨酸钙。苯甲酸盐的例子是苯甲酸 钠、苯甲酸钾和苯甲酸钙。对羟基苯甲酸烷基酯的例子是对羟基苯甲酸甲 酯、对羟基苯甲酸乙酯和对羟基苯甲酸丙酯。对羟基苯甲酸烷基酯的盐的 例子是对羟基苯甲酸甲酯的钠盐、对羟基苯甲酸乙酯的钠盐和对羟基苯甲 酸丙酯的钠盐。

本文使用的标准平板计数根据ISO 4833：1991(E)(微生物学—微生物 计数的综合指导-30℃下的菌落计数技术)测定。

酵母计数根据ISO 7954：1987(E)(微生物学—酵母和霉菌计数的综合 指导-25℃下的菌落计数技术)测定。

霉菌计数根据ISO 7954：1987(E)(微生物学—酵母和霉菌计数的综合 指导-25℃下的菌落计数技术)测定。

根据本发明的第二方面，提供了包含天冬氨酸蛋白酶和下述化合物的 液体组合物，所述化合物选自甲酸盐、乙酸盐、乳酸盐、丙酸盐、苹果酸 盐或富马酸盐。这些化合物可对微生物稳定性作出贡献。应当理解这些化 合物是相应的有机酸(甲酸、乙酸、乳酸、丙酸、苹果酸和富马酸)的阴 离子，这些化合物可以作为有机酸或其盐被补充进组合物中。盐可以是例 如钾盐、钠盐或钙盐。