[发明专利]肾源干细胞繁殖、鉴别及用途

说明书

技术领域：

本发明涉及干细胞及其用途。

背景技术：

已知许多成人组织含有多能干细胞，这些干细胞涉及维持组织完整性以及修复过程。

损伤后再生肾脏组织的能力使得肾脏干细胞的可用性对于保护和治疗任何类型的肾损伤的前景而言非常重要。事实上，急性和慢性肾病已经成为公众健康危机，这是因为其流行病学相关性以及替代疗法(例如透析和移植)的高费用。

发明内容：

本发明使得在其表面上共表达CD133和CD24标记的肾脏干细胞可用。

附图说明：

图1显示在成人肾脏肾小囊(即鲍曼氏囊)中CD24和CD133干细胞标记的共表达以及识别细胞亚群。

图2涉及分离和表征CD24+CD133+细胞。

图3显示CD24+CD133+细胞增殖能力与CD24-CD133-细胞的对比。

图4显示源自肾小囊的CD24+CD133+细胞所得克隆分化为小管上皮细胞。

图5显示源自肾小囊CD24+CD133+细胞所得克隆分化为成骨细胞和脂肪细胞。

图6显示源自肾小囊的CD24+CD133+细胞所得克隆的神经元表型和功能特性。

图7显示注入急性肾衰竭(ARF)的严重联合免疫缺陷(SCID)鼠的人类肾脏CD24+CD133+细胞以及不同类型管状细胞世代。

图8显示CD24+CD133+细胞保护甘油处理的鼠的肾脏结构和功能退化。

具体实施方案：

本发明通过多能肾脏干细胞克服前述问题。

事实上，令人惊讶地发现可以在其表面共表达CD133和CD24标记(CD24+CD133+)的肾脏细胞拥有干细胞能力。

鉴别和分离肾脏干细胞。

20个正常人肾脏已经通过使用抗-CD24和抗-CD133单克隆抗体的共聚焦显微镜检查过。CD24(肾脏胚祖细胞标记)被发现选择性地表达在肾小囊壁层上皮细胞上和小管上皮细胞亚群内。抗-CD133单克隆抗体(选择性识别源自各种人类组织的干细胞)检测肾小囊细胞亚群和少量小管结构(图1)。CD24和CD133的双重免疫荧光显示两个标记识别的肾小囊细胞亚群主要位于肾小球的尿极并且经常延伸到最接近尿极的小管部分(图1)。同样的细胞也被抗-CD106单克隆抗体所标记。总的说，这些结果意味着在成人肾脏中在肾小囊上皮水平的细胞群和少量小管上皮细胞存在，在其中不同的干细胞标记被共表达，如图1所示，各图详述如下：

a)双重免疫荧光着色，显示CD24(红)和CD133(绿)在源自成人的肾小囊细胞中的表达。两个叠加的着色图案(黄)显示CD24和CD133共表达在位于尿极的细胞亚群(标尺(Bar)50μm)。To-pro-3染色剂复染细胞核(蓝)。

b)双重免疫荧光着色，在更高的放大率下发现，显示CD24(红)和CD133(绿)在肾小囊细胞中表达。两个着色图案的叠加显示CD24和CD133共定位在细胞质中以及面对肾小球(G)的细胞膜上，而只有CD24表达在基底膜(黄色，Bar10μm)。To-pro-3染色剂复染细胞核(蓝)。

c)用两种不同抗-CD133单克隆抗体检测CD133。抗体293C3(红)和抗体AC133(绿)着色同一肾小囊中的细胞亚群。显示所有着色图案的叠加图像显示同一细胞的共染色(黄，Bar50μm)。To-pro-3染色剂复染细胞核(蓝)。

d)在肾小球层级检测CD24(红)、CD133(绿)和CD29(蓝)。CD29着色使得识别入球微动脉(AA)。叠加的图像显示CD24和CD133选择性共表达在位于血管极对侧的细胞亚群(黄，Bar50μm)。

e)三重免疫荧光着色，在更高放大率下发现，显示CD24(红)、CD133(绿)和CD106(蓝)在囊细胞的表达。叠加图像显示CD24和CD133(黄)在细胞质中以及在面对肾小球(G)的细胞膜上共定位，而CD24和CD106(紫色)共表达在基底膜上。CD24、CD133和CD106共表达的可见区域被染成白色(Bar10μm)。