[发明专利]PHL P1变应原衍生物

说明书

技术领域

本发明涉及野生型蛋白质变应原Phl p1的衍生物及其制备方 法。

背景技术

变态反应是遗传性的或获得性的对通常是无害的外源性(即非 己)物质(“变应原”)的反应能力的特异性改变。变态反应与受累 器官系统(皮肤、结膜、鼻、咽、支气管粘膜和胃肠道)的炎性反 应，速发疾病症状，如变态反应性鼻炎、结膜炎、皮炎、过敏性休 克和哮喘，和慢性疾病现象，如哮喘和特应性皮炎的迟发期反应有 关。

I型变态反应代表了一种遗传决定的影响到约20％的世界工业 化人口的超敏反应性疾病。I型变态反应的病理生理学标志是抗别 的无害抗原(变应原)的免疫球蛋白E(IgE)抗体的产生。

目前，治疗变态反应的唯一病因形式是变应原特异性免疫治 疗，其中增加给予患者的变应原剂量以诱导变应原特异性的无应答 性。虽然一些研究已经显示了变应原特异性免疫治疗的临床有效 性，但并没有充分理解其根本机制。

变应原特异性免疫治疗的主要缺点是依赖于使用天然变应原 提取物，而天然变应原提取物如果不是因为无法标准化而难以得 到，也至少因为难以达到工业化生产水平而难以得到。这些天然变 应原提取物由不同的变应原和非变应原复合物构成，并且由于这一 事实，有可能在给药提取物中不存在某些变应原或甚至更糟糕的是 在治疗过程中患者对其成分形成新的Ig E特异性。基于提取物的治 疗的另一个缺点来自于给予生物活性变应原制剂能够引起过敏反 应副作用这一事实。

分子生物学技术在变应原鉴定领域中的应用使编码所有相关 的环境中的变应原的cDNA得以分离，并得以制备重组变应原。使 用这种重组变应原使得通过体外诊断方法(即检测血清中的变应原 特异性IgE抗体)或者通过体内试验确定个体患者的反应性谱成为 可能。基于这一技术，有可能开发新的基于成分的抗变态反应的疫 苗接种策略，尤其是抗患者致敏谱明确的I型变态反应的疫苗接种 策略。然而，由于重组变应原与它们对应的天然物质的相似性，重 组变应原也表现出显著的变应原活性。由于重组变应原与野生型变 应原的变应原活性非常接近，所以在使用天然变应原进行免疫治疗 时出现的与此变应原活性有关的缺点在使用重组变应原时也同样 存在。为了改进免疫治疗，不得不降低重组变应原的变应原活性以 便能增加变应原的给药剂量而仅有很低的过敏反应副作用的风险。

建议通过给予仅包含T细胞表位的多肽完全影响变应原特异性 T细胞的活性。T细胞表位代表完整变应原经抗原呈递细胞的蛋白 水解消化产生的小分子多肽。这种T细胞表位能通过多肽的合成而 制备。然而，迄今为止用T细胞表位所做的试验仅显示出差的结果 和低的有效性。考虑以下因素可以解释一些基于T细胞表位多肽的 免疫治疗的有效性低的原因：第一，很难给予为T细胞所耐受而不 使之激活的最佳剂量。第二，小的T细胞表位多肽在体内的半衰期 很短。第三，有相当多的证据表明，特应性个体IgE的产生代表了 不需重新类型转换从而不能被T细胞来源的细胞因子所调控的记忆 性免疫应答。完全基于T细胞表位的给药的治疗形式可因此调制变 应原特异性T细胞的活性，但可几乎不影响已经转换的记忆性B细 胞产生变应原特异性IgE抗体。

另一个建议就是通过重组DNA技术或多肽合成技术制备低变 应原性变应原衍生物或片段。这种衍生物或片段带有T细胞表位并 能诱导IgG抗体与IgE竞争天然变应原的识别位点。在20多年前 证明变应原的蛋白质水解消化作用产生小的变应原片段，这些片段 部分保留了其IgE结合能力但不能引起速发型反应。虽然变应原的 蛋白水解过程难以控制和标准化，但分子生物学研究开辟了新的制 备IgE结合半抗原的途径。这种IgE结合半抗原因其发生过敏性反 应的风险低已经建议用于主动免疫接种，并且建议用于被动治疗使 效应细胞结合的IgE在接触变应原之前饱和从而阻断变应原诱导的 介质释放。