[发明专利]用寡核苷酸微球阵列检测人乳头瘤病毒的试剂盒和方法

权利要求书

1.一种选自核苷酸序列SEQ ID NOs：1-25用于检测一种或多种人乳头瘤病毒(HPV)基因型的探针。

2.一组具有核苷酸序列SEQ ID NOs：27和28用于扩增人乳头瘤病毒(HPV)L1基因的引物。

3.一种具有特异于GAPDH基因的核苷酸序列SEQ ID NOs：26的GAPDH基因探针。

4.一组用于特异性扩增GAPDH基因的引物，所述引物具有核苷酸序列SEQ IDNOs：29和30。

5.一种包含权利要求1所述的探针用于检测人乳头瘤病毒(HPV)基因型的试剂盒。

6.一种还包含权利要求2所述的引物组、权利要求4所述的引物组和权利要求3所述的GAPDH基因探针用于检测人乳头瘤病毒(HPV)基因型的试剂盒。

7.一种高度灵敏地检测人乳头瘤病毒(HPV)基因型的方法，此方法包含：

(1)在被分析的样品中的HPV L1基因上用一组特异于L1基因区域的正向和反向引物进行初级PCR扩增；

(2)在L1基因的初级PCR扩增产物上用一个正向或反向引物进行二级PCR扩增，以获得生物素标记的单链L1基因；

(3)使生物素标记的单链L1基因的二级PCR扩增产物与HPV基因型检测探针进行杂交反应；

(4)用结合了链亲合素的荧光物质与杂交反应产物进行反应；

(5)测量荧光物质浓度以鉴别HPV基因型。

8.根据权利要求7所述的方法，其中在进行初级PCR扩增的过程中，使用一组具有核苷酸序列SEQ ID NOs：27和28的引物进行初级PCR扩增。

9.根据权利要求7所述的方法，其中在进行二级PCR扩增的过程中，使用一个具有核苷酸序列SEQ ID NOs：28的引物进行二级PCR的扩增。

10.根据权利要求7所述的方法，其中为了获得生物素标记的单链L1基因，二级PCR的扩增是在生物素标记的dNTP存在下进行的。

11.根据权利要求7所述的方法，其中所述探针与微球结合。

12.根据权利要求7所述的方法，其中在进行杂交反应的过程中，所述探针包含一个或多个选自核苷酸序列SEQ ID NOs：1-24的探针和一个具有核苷酸序列SEQ ID NOs：25的探针。

13.一种高度灵敏地检测人乳头瘤病毒(HPV)基因型的方法，此方法包含：

(1)在被分析的样品中的HPV L1基因和GAPDH基因上用一组特异于L1基因和GAPDH基因的正向和反向引物进行初级PCR扩增；

(2)在L1基因和GAPDH基因的初级PCR扩增产物上用一个正向或反向引物进行二级PCR扩增，以获得生物素标记的单链L1基因；

(3)使生物素标记的单链L1和GAPDH基因的二级PCR扩增产物同时分别与HPV基因型检测探针和GAPDH特异性探针进行杂交反应；

(4)用结合了链亲合素的荧光物质与杂交反应产物反应；

(5)测量荧光物质浓度以鉴别HPV基因型。

14.根据权利要求13所述的方法，其中在进行初级PCR扩增的过程中，使用具有核苷酸序列SEQ ID NOs：27-30的引物对进行初级PCR扩增。

15.根据权利要求13所述的方法，其中在进行二级PCR扩增的过程中，使用一个具有核苷酸序列SEQ ID NOs：28和30的引物进行二级PCR扩增。

16.根据权利要求13所述的方法，其中为了获得生物素标记的单链L1基因，在生物素标记的dNTP存在下进行二级PCR扩增。

17.根据权利要求13所述的方法，其中所述探针与微球结合。

18.根据权利要求13所述的方法，其中在进行杂交反应的过程中所述探针包含一个或多个选自核苷酸序列SEQ ID NOs：1-24的探针、一个具有核苷酸序列SEQ ID NOs：25的探针和一个具有核苷酸序列SEQ ID NOs：26的探针。

19.根据权利要求7或13所述的方法，其中所述的荧光物质是荧光素、异硫氰酸酯、玫瑰红、藻红蛋白、picocyanin、别藻蓝蛋白、邻苯二醛、或fluorescarmine。