[发明专利]蛋白质纯化

权利要求书

1.一种纯化包含目标蛋白质和一种或多种污染物的混合物的方法，包括(a)对该混合物进行阳离子交换层析步骤，然后进行阴离子交换层析步骤，和(b)分离目标蛋白质。

2.一种纯化包含目标蛋白质和一种或多种污染物的混合物的方法，所述混合物已经利用阳离子交换层析进行了部分纯化，该方法包括(a)对该混合物进行阴离子交换层析步骤，和(b)分离目标蛋白质。

3.一种纯化包含抗体和一种或多种污染物的混合物的方法，包括(a)对该混合物进行阳离子交换柱层析，然后进行阴离子交换层析，和(b)分离目标蛋白质。

4.权利要求1-3的方法，其中所述污染物选自宿主细胞蛋白质、宿主细胞代谢物、宿主细胞组成蛋白质、核酸、内毒素、产物相关的污染物、脂质、培养基添加物和培养基衍生物。

5.权利要求4的方法，其中所述目标蛋白质被纯化为大约百万分之100(ppm)或更少的宿主细胞蛋白质和大约10pg/mg或更少的核酸的纯度。

6.权利要求1或3的方法，进一步包括一个或多个选自病毒灭活和病毒清除的额外步骤。

7.权利要求1-3的方法，其中所述阴离子交换层析在pH为大约4到大约10且电导率为大约0.1到大约10mS/cm的条件下进行。

8.权利要求1-3的方法，其中所述阴离子交换层析在pH为大约6.0到大约9.0且电导率为大约0.5到大约5mS/cm的条件下进行。

9.权利要求1-3的方法，其中所述阴离子交换层析使用膜。

10.权利要求1或3的方法，其中所述阳离子交换层析在pH为大约3到大约10且电导率为大约0.1到大约40mS/cm的条件下进行。

11.权利要求1或3的方法，其中所述阳离子交换层析在pH为大约4.0到大约9.0且电导率为大约0.5到大约15mS/cm的条件下进行。

12.权利要求1或3的方法，其中所述阳离子交换层析步骤使用选自磺酸、羧酸、羧甲基磺酸、磺基异丁基、磺基乙基、羧基、磺丙基、磺酰基、次硫酸乙基和正磷酸的配体。

13.权利要求1或3的方法，其中所述阳离子交换层析步骤在选自下组的树脂或膜上进行：Poros HS、Poros S、羧甲基纤维素、Sartobind S、BAKERBOND ABX^TM、固定于琼脂糖上的磺丙基和固定于琼脂糖上的磺酰基，MonoS、MiniS、Source 15S、30S、SPsepharose、CM Sepharose、BAKERBOND Carboxy-Sulfon、WPCBX、WP Sulfonic、Hydrocell CM、Hydrocel SP、UNOsphere S、Macro-Prep High S、Macro-Prep CM、Ceramic HyperD S、CeramicHyperD CM、Ceramic HyperD Z、Trisacryl M CM、Trisacryl LSCM、Trisacryl M SP、Trisacryl LS SP、Spherodex LS SP、DOWEX细筛强酸阳离子树脂、DOWEX MAC-3、Matrex Cellufine C500、Matrex Cellufine C200、Fractogel EMD SO3-、Fractogel EMD SE、Fractogel EMD COO-、Amberlite弱及强阳离子交换剂、Diaion弱及强阳离子交换剂、TSK Gel SP-5PW-HR、TSK Gel SP-5PW、Toyopearl CM(650S、650M、650C)、Toyopearl SP(650S、650M、650C)、CM(23、32、52)、SE(52，53)、P11、Express-Ion C和Express-Ion S。

14.权利要求1-3的方法，其中所述阴离子交换层析步骤使用选自季铵或胺、二乙胺、二乙氨基丙基、氨基、三甲基铵乙基、三甲基苄基铵、二甲基乙醇苄基铵、多胺的配体。