[发明专利]利用PUFA聚酮化合物合成酶系统在异源的生物体中产生多不饱和脂肪酸的方法

权利要求书

1.分离的核酸分子，其编码催化长链PUFA游离脂肪酸(FFA)转化成酰 基辅酶A的酰基辅酶A合成酶(ACoAS)，其中所述核酸序列编码选自以下 的酰基辅酶A合成酶(ACoAS)：SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:85、SEQ ID  NO:87、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:95、 SEQ ID NO:97和SEQ ID NO:99。

2.权利要求1的分离的核酸分子，其中所述核酸序列编码选自以下的氨 基酸序列：SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:85和SEQ ID NO:97。

3.权利要求1的分离的核酸分子，其中所述核酸序列选自SEQ ID  NO:82、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:90、 SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:94、SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:98。

4.由权利要求1至3中任一项的核酸分子编码的分离的蛋白质。

5.重组核酸分子，其包含可操作地与表达控制序列相连的权利要求1至 3中任一项的核酸分子。

6.重组宿主细胞，其包含权利要求5的重组核酸分子。

7.权利要求6的重组宿主细胞，其中所述宿主细胞为微生物。

8.经遗传修饰的微生物，其中所述微生物已被遗传修饰来表达权利要求 1至3中任一项的至少一种分离的核酸分子。

9.权利要求8的经遗传修饰的微生物，其中所述微生物表达PUFA合成 酶和磷酸泛酰巯基乙氨基转移酶(PPTase)，所述PUFA合成酶产生至少一种 多不饱和脂肪酸(PUFA)。

10.权利要求9的经遗传修饰的微生物，其中所述微生物对催化长链 PUFA游离脂肪酸(FFA)转化成酰基辅酶A的第二酰基辅酶A合成酶(ACoAS) 进行表达。

11.权利要求10的经遗传修饰的微生物，其中所述第二酰基辅酶A 合成酶(ACoAS)来自隐甲藻(Crypthecodinium cohnii)。

12.权利要求10的经遗传修饰的微生物，其中所述第二酰基辅酶A 合成酶(ACoAS)来自破囊壶菌目(Thraustochytriales)微生物。

13.权利要求10的经遗传修饰的微生物，其中所述第二酰基辅酶A 合成酶(ACoAS)来自裂殖壶菌属(Schizochytrium)。

14.权利要求10至13中任一项的经遗传修饰的微生物，其中所述微 生物含有对由所述微生物表达的脂肪酸合成酶(FAS)进行除去或钝化的额外 的遗传修饰。

15.权利要求10至13中任一项的经遗传修饰的微生物，其中所述微 生物含有在所述微生物中就丙二酰辅酶A而言减少与PUFA合成酶的竞争或 提高丙二酰辅酶A的水平的额外的遗传修饰。

16.权利要求10至13中任一项的经遗传修饰的微生物，其中所述微 生物含有对一种或多种来自内源性地产生PUFA的生物体的异源性蛋白质 进行表达的额外的遗传修饰，其中所述蛋白质在形成磷脂(PL)或三酰甘油 (TAG)时使用PUFA-CoA作为底物。

17.权利要求16的经遗传修饰的微生物，其中所述蛋白质为DAGAT 或LPAAT。

18.权利要求16的经遗传修饰的微生物，其中所述微生物用以下核酸 分子进行转化，所述核酸分子对来自破囊壶菌或Labyrinthulid的、在形成磷 脂(PL)或三酰甘油(TAG)时使用PUFA-CoA作为底物的蛋白质进行编码。