[发明专利]培养肌腱细胞的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种培养肌腱细胞的方法。特别地，本发明涉及一种使用选 择性的培养基培养肌腱细胞以生成充分纯的肌腱细胞培养物的方法。

背景技术

细胞培养是具有许多应用的技术，但是，有些细胞(例如肌腱细胞、肝 细胞、成骨细胞、成肌细胞和心肌细胞)很难培养和/或培养很慢和/或在培 养中易于表现出不稳定的表型和去分化。培养的肌腱细胞尤其可以用于修复 损伤的肌腱和韧带。

肌腱损伤的一个常见的例子是肩袖撕裂(tear in the rotator cuff tendon)。 这通常由过头的行动引起的，并且表现出高的临床发病率。旋转带肌腱 (rotator cuff tendon)完整性的丧失导致强度测量减弱，运动和功能范围降 低。尽管肩袖撕裂的外科修复实现了高水平的功能改善，并且患者的满意度 也很高，但是，有些肌腱修复，特别是大的肌腱或收缩肌腱撕裂，不能治愈 或者在外科手术后再被撕裂。和初次治疗相比，对旋转带修复失败后的再修 复外科手术的成功率极低。

肌腱修复的基本原理是防止肌腱细胞的凋亡和在受损的肌腱内再生正 常的肌腱细胞，但是这需要发展体外培养的表型稳定的肌腱细胞。但是肌腱 或韧带的再生需要大量的肌腱细胞。此外，该肌腱细胞的表型应该与机体内 的肌腱细胞的表型尽可能接近。理想情况下，培养的肌腱细胞与需要肌腱修 复的受试者的肌腱细胞是自体同源的。

目前，没有适当方法来培养一致性程度足够用于修复肌腱或韧带损伤的 肌腱细胞。文献中描述的许多方法包括在生长因子(例如类胰岛素生长因子 I或II，即IGF-I或IGF-II)的存在下，培养完整的肌腱或者极细碎的肌腱(例 如，参见Dahlgren，等2001，AJVR，62(10)：1557-1562；Kang和Kang，1999， Yonsei Med.J.，40(1)：26-29；Abrahamsson，1996，J.Ortho.Res.，15：256-262； Abrahamsson和Lohmander，1996，J.Ortho.Res.，14：370-376；Abrahamsson 等，1991，Ortho.Res.Soc.，9：495-502和503-515；以及Anitua等，2005，J.Ortho. Res.，23：281-286)。虽然这些方法显示出促进了“类肌腱”或“衍生自肌腱” 细胞的生长，但是已经充分确定的是，肌腱不仅仅含有肌腱细胞。实际上， 肌腱中的大多数细胞为与内皮细胞在一起的成纤维细胞、滑膜细胞和一些软 骨细胞。因此，已知的用于培养肌腱细胞的方法不能产生纯的肌腱细胞培养 物，而是产生含有纤维细胞、内皮细胞和少量肌腱细胞的混合细胞群。众所 周知，肌腱细胞是生长很慢的细胞，这样经常使培养过程中存在的其它细胞 过度生长。这就意味着现有技术中的培养衍生自肌腱细胞的方法一般不能产 生足够用于组织修复过程的肌腱细胞。

因此，需要一种能培养足以用于组织修复过程的肌腱细胞的方法。

发明内容

因此，本发明的第一方面提供了一种肌腱细胞培养基，该肌腱细胞培养 基含有胰岛素或其功能性衍生物。在一些实施方式中，该培养基含有约 0.00005％重量/体积至0.1％重量/体积的胰岛素或其功能性衍生物。在其它的 实施方式中，该培养基含有约0.0001％重量/体积至0.001％重量/体积的胰岛 素或其功能性衍生物。在其它的实施方式中，该培养基含有约0.0006％重量 /体积的胰岛素或其功能性衍生物。

第一方面的培养基还可以含有糖皮质激素，例如合成的糖皮质激素或类 糖皮质激素分子。在一些实施方式中，该糖皮质激素为倍他米松 (betamethasone)。该培养基可以含有约0.00001％重量/体积至0.1％重量/体 积的糖皮质激素或类糖皮质激素分子。在一些实施方式中，该培养基含有约 0.0001％重量/体积至0.001％重量/体积的糖皮质激素或类糖皮质激素分子。 在其它的实施方式中，该培养基含有约0.0002％重量/体积的糖皮质激素或类 糖皮质激素分子。