[发明专利]微生物乙醇生产的增强

权利要求书

1.缺乏乳酸脱氢酶活性的嗜热微生物，其特征在于所述嗜热微生 物包含编码NAD连接型甲酸脱氢酶的基因。

2.权利要求1的嗜热微生物，其表达丙酮酸甲酸裂合酶。

3.权利要求1或2的嗜热微生物，其中所述编码NAD连接型甲酸脱 氢酶的基因整合到所述嗜热微生物的基因组中。

4.权利要求1至3中任一项的嗜热微生物，其中所述编码NAD连接 型甲酸脱氢酶的基因从其自身启动子或从所述嗜热微生物的启动子表达。

5.权利要求1至4中任一项的嗜热微生物，其中所述编码NAD连接 型甲酸脱氢酶的基因插入到所述嗜热微生物的乳酸脱氢酶基因中，从而灭 活所述嗜热微生物的乳酸脱氢酶活性。

6.权利要求1至5中任一项的嗜热微生物，其中所述编码NAD连接 型甲酸脱氢酶的基因编码耐热的NAD连接型甲酸脱氢酶。

7.前述任一项权利要求的嗜热微生物，其中所述编码NAD连接型甲 酸脱氢酶的基因包含如SEQ ID NO：1或2所示的核苷酸序列。

8.前述任一项权利要求的嗜热微生物，其已被包含调节序列的DNA 构建体所转化，所述调节序列操作性连接至编码耐热NAD连接型甲酸脱 氢酶的基因，所述编码耐热NAD连接型甲酸脱氢酶的基因包含如SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。

9.权利要求1至7中任一项的嗜热微生物，其已被包含编码NAD连 接型甲酸脱氢酶基因和插入序列的DNA构建体所转化，其中所述插入序 列促进所述编码NAD连接型甲酸脱氢酶的基因整合入被该DNA构建体转 化的所述嗜热微生物的基因组中。

10.权利要求1至7中任一项的嗜热微生物，其已被包含编码NAD连 接型甲酸脱氢酶之基因的DNA构建体所转化，所述编码NAD连接型甲酸 脱氢酶的基因操作性连接到编码乳酸脱氢酶基因的上游区，其中所述上游 区包含启动子。

11.权利要求10的嗜热微生物，其中在所述编码NAD连接型甲酸脱 氢酶基因的下游，所述DNA构建体还包含编码所述乳酸脱氢酶基因的至 少一部分，使得所述编码NAD连接型甲酸脱氢酶的基因介于在任一侧上 所述乳酸脱氢酶基因的充分部分之间，以促进将所述编码NAD连接型甲 酸脱氢酶的基因通过与乳酸脱氢酶基因重组而整合到所述嗜热微生物的 基因组中。

12.前述任一项权利要求的嗜热微生物，其是嗜热细菌。

13.权利要求12的嗜热微生物，其属于芽孢杆菌属。

14.权利要求13的嗜热微生物，其是嗜热脂肪芽胞杆菌(Bacillus stearothermophilus)或热葡糖苷酶地芽孢杆菌(Geobacillus thermoglucosidasius)。

15.权利要求14的嗜热微生物，其中所述的嗜热脂肪芽胞杆菌来源于 菌株LLD-R或LLD-15。

16.编码耐热NAD连接型甲酸脱氢酶的基因，其包含如SEQ ID NO：1 所示的核苷酸序列。

17.包含调节序列的DNA构建体，所述调节序列操作性连接到编码耐 热NAD连接型甲酸脱氢酶的基因，所述编码基因包含如SEQ ID NO：1所 示的核苷酸序列。

18.权利要求17的DNA构建体，其中所述调节序列是启动子。

19.权利要求18的DNA构建体，其中所述启动子包含如SEQ ID NO：4 所示的核苷酸序列。

20.包含编码NAD连接型甲酸脱氢酶基因和插入序列的DNA构建 体，其中所述插入序列促进将编码NAD连接型甲酸脱氢酶的基因整合入 用该DNA构建体转化的嗜热微生物的基因组中。

21.权利要求20的DNA构建体，其中所述插入序列来源于嗜热脂肪 芽胞杆菌菌株LLD-R或LLD-15。