[发明专利]核苷酸链的修饰方法

权利要求书

1.核苷酸链的修饰方法，其特征在于，在将作为修饰对象的核苷酸链、 具有特定碱基的核苷酸、将催化附加反应的酶的反应活性温和的缓冲剂成 分和将催化附加反应的酶活化的活化因子进行混合而得的反应混合液中， 使末端脱氧核苷酸转移酶、特异地作用于所述核苷酸的分解酶和修饰所述 核苷酸链的具有-NH₂的修饰物质共存，在将所述核苷酸附加到所述核苷酸链 的3′末端的同时，分解所附加的核苷酸的序列而在所述核苷酸链的3′末端形 成对于所述修饰物质具有结合能力的官能团，用所述修饰物质直接对形成 有所述官能团的核苷酸链的3′末端进行修饰；所述特定碱基是腺嘌呤、鸟 嘌呤、胞嘧啶或胸腺嘧啶经烷基化、脱氨基化、卤化、羟基化或氧化而得 的突变碱基；所述官能团为醛基；

所述的活化因子是锰离子或镁离子；

所述的特异地作用于所述核苷酸的分解酶为DNA糖苷酶或DNA修复酶。

2.如权利要求1所述的核苷酸链的修饰方法，其特征在于，缓冲剂成 分是4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-乙磺酸、2-吗啉代乙磺酸或3，3-二甲基戊二 酸。

3.如权利要求1所述的核苷酸链的修饰方法，其特征在于，附加的核 苷酸为2′-脱氧尿苷-5′-一磷酸时，分解酶使用尿嘧啶DNA糖苷酶。

4.如权利要求1或3所述的核苷酸链的修饰方法，其特征在于，修饰物 质是对核苷酸链进行标签化、标记化的物质。

5.如权利要求1所述的核苷酸链的修饰方法，其特征在于，修饰物质 是荧光性物质、维生素、脂质、氨基酸、寡肽、蛋白质或生物体外源性物 质。

6.如权利要求1或3所述的核苷酸链的修饰方法，其特征在于，修饰物 质是为了使核苷酸链结合于基板而介于其间的物质。

7.如权利要求5所述的核苷酸链的修饰方法，其特征在于，修饰物质 是具有氨基和巯基的化合物。

8.如权利要求6所述的核苷酸链的修饰方法，其特征在于，修饰物质 是具有氨基和通过水解而形成硅烷醇基的烷氧基硅烷基的化合物。

9.如权利要求1所述的核苷酸链的修饰方法，其特征在于，在加入有 具有任意的碱基序列的核苷酸链的缓冲液中混合2′-脱氧尿苷-5′-三磷酸、 末端脱氧核苷酸转移酶及其活化因子和尿嘧啶DNA糖苷酶，对该反应混合液 进行加热处理或碱处理后，在该经过处理的反应混合液中混合具有H₂N-的修 饰物质。