[发明专利]用于产生淀粉水解物的方法

权利要求书

1.一种方法，其包括使用如下物质将颗粒状淀粉糖化：

a)葡糖淀粉酶，

b)包含碳水化合物结合模块(CBM)的细菌α-淀粉酶，和，

c)包含CBM的真菌α-淀粉酶，

以产生淀粉水解物。

2.权利要求1的方法，还包括将所述淀粉水解物与发酵生物体接触以产生发酵产物。

3.权利要求1或2中任一项的方法，其中糖化和发酵同时进行。

4.权利要求1-3中任一项的方法，其中在发酵后回收所述发酵产物。

5.权利要求1-4中任一项的方法，其中所述发酵产物是醇，优选乙醇，尤其是燃料乙醇，可饮用乙醇和/或工业乙醇。

6.权利要求1-5中任一项的方法，其中所述包含CBM的真菌α-淀粉酶和/或包含CBM的细菌α-淀粉酶是酸性真菌α-淀粉酶和/或酸性细菌α-淀粉酶。

7.权利要求1-6中任一项的方法，其中所述包含CBM的真菌α-淀粉酶和/或包含CBM的细菌α-淀粉酶是包含CBM的野生型酶或野生型酶的遗传修饰的变体。

8.权利要求1-7中任一项的方法，其中所述包含CBM的真菌α-淀粉酶源自川地曲霉的菌株。

9.权利要求1-8中任一项的方法，其中所述包含CBM的细菌α-淀粉酶源自黄热芽孢杆菌的菌株。

10.权利要求1-9中任一项的方法，其中所述包含CBM的真菌α-淀粉酶和/或包含CBM的细菌α-淀粉酶是杂合酶，优选包含α-淀粉酶催化域(CD)和碳水化合物结合模块(CBM)和任选的接头的杂合酶。

11.权利要求1-10中任一项的方法，其中所述真菌α-淀粉酶催化域是与SEQ ID NO：4的13至450位氨基酸具有至少70％同源性的氨基酸序列，优选源自微小根毛霉。

12.权利要求1-11中任一项的方法，其中所述真菌CBM是与SEQ IDNO：2的488至595位氨基酸具有至少70％同源性的氨基酸序列，优选源自黑曲霉的菌株的序列，优选源自黑曲霉淀粉葡萄糖苷酶的序列。

13.权利要求1-12中任一项的方法，其中所述包含CBM的真菌α-淀粉酶是与SEQ ID NO：2的13至595位的氨基酸具有至少70％同源性的氨基酸序列。

14.权利要求1-13中任一项的方法，其中所述细菌α-淀粉酶催化域是与SEQ ID NO：1的32至520位的氨基酸具有至少70％同源性的氨基酸序列。

15.权利要求1-14中任一项的方法，其中所述细菌α-淀粉酶催化域和/或CBM源自黄热芽孢杆菌。

16.权利要求1-15中任一项的方法，其中所述细菌CBM是与SEQ IDNO：1的521至619位氨基酸具有至少70％同源性的氨基酸序列。

17.权利要求1-16中任一项的方法，其中所述葡糖淀粉酶源自罗耳阿太菌(Althea rolfsii)、环带栓菌或黑曲霉。

18.权利要求1-17中任一项的方法，其中所述方法在存在蛋白酶或肌醇六磷酸酶的条件下进行。

19.权利要求1-18中任一项的方法，其中所述含淀粉的材料从块茎、根、茎、果实或全谷物中获得。

20.权利要求1-19中任一项的方法，其中所述含淀粉的材料从谷类中获得。

21.权利要求1-20中任一项的方法，其中所述含淀粉的材料从玉米、穗轴、小麦、大麦、黑麦、买罗高粱、西米、木薯(cassava)、树薯、木薯(tapioca)、高梁、稻或马铃薯中获得。

22.权利要求1-21中任一项的方法，其中所述方法在3-7，优选3.5-6或更优选4-5的pH进行。

23.权利要求1-22中任一项的方法，其中干固体含量(DS)为20-55wt.-％，优选25-40wt.-％，更优选30-35wt.-％的范围。

24.权利要求1-23中任一项的方法，其中在糖化和发酵期间将糖浓度保持在约3wt.％以下或低于约3wt.％的水平。