[发明专利]核酸导入用组合物

说明书

技术领域

本发明涉及用于将核酸向细胞内导入的组合物。 

背景技术

作为将基因等的核酸导入到细胞内的方法，已知有使用单独的阳离子性脂质或含有其的脂质体与核酸形成的复合体的方法(例如，参照专利文献1)。实际上，作为该方法用的试剂，市售有例如“Lipofectamine”、“Lipofectin”、“Transfectam”、“Genetransfer”、“Lipofectamine 2000”等。 

但是，这些市售的试剂被指出如下问题。a)作为制剂的保存稳定性差，使用脂质体等的基因在导入细胞内、表达方面的再现性差。b)在用于细胞培养的培养基中添加的血清(Fetal Bovine Serum)中非常不稳定，采用暂时将培养细胞的加有血清的培养基置换成无血清培养基，在导入后再恢复成加有血清的培养基这样的繁琐步骤；另外，最近逐渐明确其在血液中或体内也非常不稳定。c)大多数市售品(例如Lipofectamine、Lipofectin、Lipofectamine 2000)仅以脂质已分散到水中的形态提供，形成由外部向其中添加基因水溶液的步骤，这样，虽可以制造基因结合于脂质体的外侧的复合体，但不能制造内封有基因的脂质体；另外，Lipofectamine 2000为了避免形成阳离子性脂质的过氧化物，而具有不能过度搅拌、振荡，需要细心注意这类的麻烦。d)细胞毒性非常强。 

像这样，虽然市售有几种使用单独的阳离子性脂质或脂质体使基因等核酸导入细胞内的试剂，但存在很多问题。 

专利文献1：特开平2-135092号公报 

发明内容

本发明涉及提供一种细胞毒性低、被导入核酸的细胞内导入性及在 细胞内的表达得到改善的核酸导入用组合物。 

本发明人等对低细胞毒性、改善核酸的细胞内导入性以及在细胞内表达的方法进行了精心研究，结果发现，通过将下述式(I) 

(式中，R¹和R²相同或不同，表示碳原子数12～22的饱和或不饱和的烃基，R³表示碳原子数1～6的烷基或碳原子数1～6的羟烷基，m表示1～10的整数，X表示卤原子。) 

所示的化合物和磷脂质与基因等核酸一起给予或供给到细胞，可以低细胞毒性且高效地导入核酸，从而完成了本发明。 

即，本发明涉及以下发明。 

(1)一种向细胞导入核酸用组合物，含有上述式(I)所示的化合物和磷脂质。 

(2)根据(1)所述的组合物，还含有相对于组合物中的全部脂质量为0～50摩尔％的胆甾醇和/或胆甾烷醇。 

(3)根据(1)或(2)所述的组合物，相对于组合物中的全部脂质量，式(I)所示化合物的含量为40～60摩尔％。 

(4)根据(1)～(3)中任一项所述的组合物，式(I)所示化合物与磷脂质的比(摩尔比)为2:3～16:1。 

(5)根据(1)～(4)中任一项所述的组合物，式(I)中，R¹和R²表示碳原子数12～18的烷基或链烯基，R³表示甲基，m表示1。 

(7)根据(1)～(6)中任一项所述的组合物，磷脂质为选自磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰甘油、心肌磷脂、鞘磷脂、缩醛磷脂和磷脂酸中的1种或2种以上。 

(8)根据(1)～(6)中任一项所述的组合物，磷脂质为磷脂酰乙醇胺。 

(9)根据(1)～(6)中任一项所述的组合物，磷脂质为二油酰基磷脂酰乙醇胺。 

(10)一种向细胞导入核酸用组合物，含有N-(α-三甲基铵乙酰基)-二油基-D-谷氨酸酯氯化物、二油酰基磷脂酰乙醇胺和胆甾醇。 

(11)根据(1)～(10)中任一项所述的组合物，还含有核酸。 

(12)根据(11)所述的组合物，核酸为短寡核苷酸。 

(13)根据(1)～(12)中任一项所述的组合物，形成脂质膜结构体。 

(14)根据(1)～(13)中任一项所述的组合物，形成脂质体。 

(15)根据(1)～(14)中任一项所述的组合物，是冻干物。 

(16)一种向细胞导入核酸的方法，其特征在于，将(11)～(15)中任一项所述的组合物在体外或体内应用于细胞。