[发明专利]评估肽混合物的方法

权利要求书

1.一种将醋酸格拉默样品分类的方法，所述方法包括：

(a)提供醋酸格拉默样品，其中醋酸格拉默通过下述制备：聚合L-丙氨 酸，苄基-被保护的L-谷氨酸，三氟乙酸(TFA)被保护的L-赖氨酸和L-酪氨 酸的N-羧基酐，以生成中间物-1；用HBr和乙酸处理中间物-1以部分解聚中 间物-1和脱保护苄基被保护的基团，由此生成中间物-2；用哌啶处理中间物 -2以脱保护TFA-被保护的赖氨酸和产生中间物-3；以及处理和纯化中间物-3 以提供纯化的醋酸格拉默；

(b)通过检测样品中的二乙酰胺来测定醋酸格拉默样品中C-末端结合了 二乙酰胺部分的多肽的量；

(c)将醋酸格拉默样品中C-末端结合了二乙酰胺部分的多肽的量与预定 的参考值比较；和

(d)基于步骤(c)的比较将醋酸格拉默样品分类。

2.权利要求1的方法，其中所述参考值选自下组：规范值、对照值和直 接测量醋酸格拉默的参考样品得到的数值。

3.权利要求2的方法，其中所述规范值包括醋酸格拉默的制药规范值。

4.权利要求3的方法，其中所述醋酸格拉默的规范值为大约7mol％- 大约20mol％的多肽具有结合于其C-末端的二乙酰胺部分。

5.权利要求4的方法，其中所述醋酸格拉默的规范值为大约8mol％- 大约18mol％的多肽具有结合于其C-末端的二乙酰胺部分。

6.权利要求5的方法，其中所述醋酸格拉默的规范值为大约10mol％- 大约15mol％的多肽具有结合于其C-末端的二乙酰胺部分。

7.权利要求6的方法，其中所述醋酸格拉默的规范值为大约12mol％- 大约14mol％的多肽具有结合于其C-末端的二乙酰胺部分。

8.权利要求7的方法，其中所述醋酸格拉默的规范值为大约13mol％的 多肽具有结合于其C-末端的二乙酰胺部分。

9.权利要求1的方法，其中所述参考值为大约60mol％-大约100mol％ 的多肽具有结合于其C-末端的二乙酰胺部分。

10.权利要求1的方法，其中所述分类步骤包括：确定醋酸格拉默是否 适合药用，确定醋酸格拉默是否适合进行进一步处理步骤，和将醋酸格拉默 投放用于药用。

11.权利要求1的方法，其中所述测定样品中C-末端结合了二乙酰胺部 分的多肽的存在或量包括选自下组的方法：液相层析、离子层析、气相层析、 毛细管电泳、质谱、液相层析/质谱、核磁共振谱、抗体检测方法、拉曼光谱、 红外光谱、荧光光谱、紫外-可见光谱、凝胶电泳和它们的组合。

12.权利要求11的方法，其中通过核磁共振方法检测二乙酰胺，所述核 磁共振方法选自下组：一维(1D)核磁共振、二维(2D)核磁共振、和三维(3D) 核磁共振、¹H核磁共振、¹³C核磁共振、¹⁵N核磁共振和它们的组合。

13.权利要求12的方法，其中所述核磁共振方法进一步包括定量核磁共 振信号。

14.权利要求13的方法，其包括通过选自下组的方法定量核磁共振信 号：

(a)积分归属为结合于C-末端的二乙酰胺部分的一个或多个核磁共振峰；

(b)去卷积处理归属为结合于C-末端的二乙酰胺部分的一个或多个核磁 共振峰；和

(c)将归属为结合于C-末端的二乙酰胺部分的核磁共振信号的积分面积 相对于归属为多肽混合物、样品中掺杂的参考分子、外部样品、经校正的射 频信号和它们的组合的核磁共振信号之一来进行校正。

15.权利要求11的方法，其中所述样品基本上不含游离氨基酸。

16.一种将醋酸格拉默分类为是否适合投放的方法，所述方法包括：

(a)提供醋酸格拉默样品；

(b)测定所述样品中具有二乙酰胺修饰的C-末端氨基酸的多肽的量；

(c)将所述样品中具有二乙酰胺修饰的C-末端氨基酸的多肽的量与醋酸 格拉默的规范值比较，其中所述醋酸格拉默的规范值为大约7mol％-大约20 mol％的多肽具有二乙酰胺修饰的C-末端氨基酸；和

(d)使用所述比较将醋酸格拉默样品分类为适合于投放，如果所述样品中 具有二乙酰胺修饰的C-末端氨基酸的多肽的量符合醋酸格拉默的规范值。