[发明专利]通过向体内递送视紫红质核酸恢复视觉响应

权利要求书

1.恢复视网膜光敏感性的方法，其包括：

(a)向视网膜神经元递送核酸表达载体，所述载体编码在所述神经元中表 达的光门控通道视紫红质或光驱动离子泵视紫红质，其中

所述载体包含编码视紫红质的开放阅读框、与所述开放阅读框可操作 连接的启动子序列和任选的转录调控序列；和

(b)在所述神经元中表达所述载体，

从而恢复光敏感性。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述视紫红质是通道视紫红质-2 (Chop2)，其序列为SEQ ID NO：6；或其生物活性片段，优选为SEQ ID NO：3； 或其保守性氨基酸替代变体。

3.如权利要求1所述的方法，其中所述载体是rAAV病毒载体。

4.如权利要求1所述的方法，其中所述启动子是组成型启动子。

5.如权利要求4所述的方法，其中所述组成型启动子是杂合的CMV增强 子/鸡β-肌动蛋白启动子(CAG)。

6.如权利要求2所述的方法，其中所述启动子是杂合的CAG。

7.如权利要求4所述的方法，其中所述组成型启动子是CMV启动子。

8.如权利要求1所述的方法，其中所述启动子是诱导型启动子和/或细胞类 型特异性启动子。

9.如权利要求8所述的方法，其中所述细胞类型特异性启动子选自于由 mGluR6启动子、Pcp2(L7)启动子或神经激肽3(NK-3)启动子组成的组。

10.如权利要求9所述的方法，其中所述启动子是mGlu6启动子，并且是 启动子序列SEQ ID NO：7的一部分。

11.如权利要求1所述的方法，其中所述载体包含杂合的CMV增强子/鸡β- 肌动蛋白(CAG)启动子、土拨鼠转录后调控元件(WPRE)和人或牛生长激素 多聚腺苷序列。

12.如权利要求2所述的方法，其中所述载体包含CAG启动子、土拨鼠转 录后调控元件(WPRE)和人或牛生长激素多聚腺苷化序列。

13.如权利要求1所述的方法，其中所述视网膜神经元选自于ON型和OFF 型视网膜神经节细胞、视网膜杆状双极细胞、AII无长突细胞以及ON和OFF 视网膜锥状双极细胞。

14.如权利要求13所述的方法，其中所述载体靶向于ON型神经节细胞和/ 或ON型双极细胞并在ON型神经节细胞和/或ON型双极细胞中表达。

15.如权利要求14所述的方法，其中所述载体包含mGluR6启动子。

16.如权利要求15所述的方法，其中所述mGluR6启动子是启动子序列SEQ ID NO：7的一部分。

17.如权利要求9所述的方法，其中所述启动子是NK-3启动子，并且所述 载体靶向OFF锥状双极细胞。

18.恢复视觉丧失或失明受试者视网膜神经元的光敏感性的方法，其中所述 受试者的视网膜感光细胞正在发生退化或已经发生退化和死亡，所述方法包括：

(a)向所述受试者的视网膜递送核酸载体，所述载体编码在所述神经元中 表达的光门控通道视紫红质或光驱动离子泵视紫红质，其中

所述载体包含编码视紫红质的开放阅读框、与所述开放阅读框可操作

连接的启动子序列和任选的转录调控序列；和

(b)在所述神经元中表达所述载体，

其中所述视紫红质的表达赋予所述神经元光敏感性，从而恢复所述视网膜 的光敏感性。

19.如权利要求18所述的方法，其中所述视紫红质是Chop2或其生物活性 片段或其保守性氨基酸替代变体。

20.如权利要求18所述的方法，其中所述载体是rAAV病毒载体。

21.如权利要求18所述的方法，其中所述启动子是组成型启动子。