[发明专利]用于免疫治疗的HLA-B7隐性表位的鉴定、优化与应用

说明书

本发明涉及肽的免疫治疗领域。特别地，本发明提供了用于有效治疗具 有HLA-B*0702表型的患者的新型方法和材料。

在目前癌症治疗中，免疫治疗是极其引人注意的治疗方法。其原理是基 于利用可使肿瘤抗原T细胞表位再生的肽进行免疫，该表位可以被在肿瘤细 胞的清除中起重要作用的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)识别。

经回顾可知，CTL识别的并不是全蛋白抗原，而是全蛋白抗原的肽片段， 该肽片段通常包含8～11个氨基酸并由表达在细胞表面的I型主要组织相容 性复合体(MHC I)分子提呈。这些肽的提呈是抗原加工的结果，包括三个 步骤：

(1)由被称为蛋白酶体的多酶复合体对抗原进行胞质降解；

(2)来自上述降解的肽被TAP转运体转移至内质网(ER)中；

(3)使这些抗原与MHC I分子结合，并把所述肽/MHC I复合体转运到 细胞表面。

所述肽/MHC I复合体与CTL上的特异性T细胞受体(TCR)相互作用， 诱导这些CTL的刺激和扩增，以使其能够攻击表达衍生出所述肽的抗原的靶 细胞。

在抗原加工的过程中发生肽选择，从而引起肽提呈的层级(hierarchy)。 被MHC I分子优先提呈的肽被称为免疫显性肽，而较少被MHC I分子提呈 的肽则被称为隐性肽。免疫显性肽对MHC I具有高亲和力并且具有免疫原 性，而隐性肽则对MHC I具有低亲和力并且不具有免疫原性。

已经在临床前和临床研究中使用肿瘤疫苗靶向大量的免疫显性肽，然而 结果令人失望(Bowne et al.，1999；Colella et al.，2000；Gross et al.，2004； Hawkins et al.，2000；Naftzger et al.，1996；Overwijk et al.，1998；Vierboom et al.， 1997；Weber et al.，1998)。

肿瘤抗原通常为在肿瘤中过量表达而在正常细胞和组织中以低水平表达 的自身蛋白(selfproteins)。因为自身耐受的过程，免疫系统不会与这些自身 抗原发生反应。自身耐受主要针对免疫显性肽(Cibotti et al.，1992；Gross et al.， 2004；Hernandez et al.，2000；Theobald et al.，1997)，由此解释了这些肽不能诱 导肿瘤免疫的原因。

隐性肽较少参与自身耐受过程(Anderton et al.，2002；Boisgérault et al.， 2000；Cibotti et al.，1992；Friedman et al.，2004；Gross et al.，2004；Moudgil et al.， 1999；Overwijk et al.，2003；Sinha et al.，2004)并由此能够诱导有效的肿瘤免 疫，但前提是它们的免疫原性得到了增强(Disis et al.，2002；Dyall et al.，1998； Engelhorn et al.，2006；Gross et al.，2004；Grossmann et al.，2001；Lally et al.， 2001；Moudgil和Sercarz，1994a；Moudgil和Sercarz，1994b；Palomba et al.， 2005)。

因为隐性肽不具有免疫原性的原因是其MHC I亲和力低下，所以增强隐 性肽免疫原性的常见策略是通过氨基酸取代提高其对MHC I分子的亲和力。 肽对MHC I分子的亲和力主要依赖于在明确界定的位点(初级锚定位点)存 在被称为“初级锚定残基”的残基。这些残基具有MHC I等位基因特异性。 虽然初级锚定残基的存在通常都是必须的，但这并不足以保证对MHC I的高 亲和力。已经表明位于初级锚定位点之外的残基(次级锚定残基)可以对肽 与MHC I的亲和力发挥有利或不利影响(Parker et al.，1994；Rammensee H et al.，1999)。这些次级锚定残基的存在使得人们有可能对具有初级锚定基序的 肽在结合亲和力上存在的巨大可变性做出解释。

以增强对MHC I分子的亲和力为目的的氨基酸取代应保持此种优化肽 的抗原性。由优化肽产生的CTL应与相应的天然肽发生交叉反应。