[发明专利]无血清培养基及其在软骨细胞扩增中的用途

权利要求书

1.制备用于治疗受试者的软骨缺陷的药物的方法，其中该方法包括通 过用包含补加了制瘤素M，即OSM，的基础培养基的培养基孵育软骨细 胞来增殖软骨细胞，和使用所述增殖的软骨细胞制备所述药物，

其中OSM在培养基中以0.1ng/ml到2ng/ml的浓度存在。

2.权利要求1所述的方法，其中所述基础培养基另外补加了白介素-6， IL-6。

3.权利要求1所述的方法，其中所述基础培养基另外补加了白血病抑 制因子LIF。

4.权利要求1所述的方法，其中所述基础培养基另外补加了IL-6和 LIF。

5.权利要求1-4之任一项所述的方法，其中所述基础培养基另外补加 了血小板衍生生长因子PDGF。

6.权利要求1-4之任一项所述的方法，其中所述基础培养基另外补加 了一种或多种脂，选自硬脂酸、肉豆蔻酸、油酸、亚油酸、棕榈酸、棕榈 油酸、花生四烯酸、亚麻酸、胆固醇和α-生育酚醋酸酯。

7.权利要求1-4之任一项所述的方法，其中所述基础培养基为cDRF。

8.权利要求1所述的方法，其中所述基础培养基为cDRF，另外补加 了PDGF和化学上确定的脂混合物CDLM。

9.权利要求1所述的方法，其中所述基础培养基为cDRFm，另外补 加了PDGF和CDLM。

10.权利要求1所述的方法，其中所述基础培养基为cDRFm，另外补 加了IL-6、PDGF和CDLM。

11.权利要求1-4之任一项所述的方法，其中基础培养基不补加纯的 jagged 1，即JAG1，和/或纯的白介素-13，即IL-13。

12.权利要求1所述的方法，其中OSM在培养基中以0.5ng/ml到 1ng/ml的浓度存在。

13.权利要求2所述的方法，其中IL-6在培养基中以0.01ng/ml到10 ng/ml的浓度存在。

14.权利要求3所述的方法，其中LIF在培养基中以0.01ng/ml到10 ng/ml的浓度存在。

15.权利要求4所述的方法，其中IL-6和LIF在培养基中各以0.01 ng/ml到10ng/ml的浓度存在。

16.权利要求1-4之任一项所述的方法，其中培养基无血清。

17.权利要求1-4之任一项所述的方法，其中培养基还包含血清。

18.权利要求1所述的方法，其中培养基包含：cDRFm；0.1-100ng/ml PDGF；0.05-5％CDLM；0.1-2ng/ml OSM；和0.01-10ng/ml IL-6。

19.权利要求1所述的方法，其中软骨细胞为去分化的细胞。

20.权利要求1所述的方法，其中软骨细胞来自间充质干细胞。

21.权利要求1所述的方法，其中软骨细胞为人软骨细胞。

22.权利要求21所述的方法，其中软骨细胞为人关节软骨细胞。

23.权利要求1和19-22之任一项所述的方法，其中软骨细胞为原代软 骨细胞。

24.权利要求1所述的方法，还包括细胞传代的步骤。

25.权利要求24所述的方法，其中细胞通过用包含螯合剂的溶液孵育 进行传代。

26.权利要求25所述的方法，其中螯合剂为EDTA。

27.权利要求26所述的方法，其中EDTA在溶液中以0.1mM到1mM 的浓度存在。

28.权利要求24所述的方法，其中细胞通过用包含少于325单位/ml 胰蛋白酶的溶液孵育进行传代。