[发明专利]筛选抑制TM4SF5功能的抗癌化合物和含有查耳酮化合物的抗癌组合物的方法

权利要求书

1.一种筛选抗癌化合物的方法，包括：

(a)培养表达序列号：2的多肽的癌细胞，并使用抗癌候选物处理 癌细胞；

(b)在用抗癌候选物处理的癌细胞中检测下列中的至少一种：(i) 在编码粘着斑激酶(FAK)的氨基酸序列的第577位色氨酸(Tyr577) 的磷酸化作用，(ii)将FAK结合到Rho-GTPase活化蛋白质(RhoGAP)或 者将FAK结合到与FAK有关的GTPase调节子(GRAF)，(iii)细胞液 p27^Kip1的表达水平和稳定性，(iv)RhoA活性，和(v)Rac1活性；以 及

(c)当下列事件发生时，与当没有用抗癌候选物进行处理时相比 较，确定抗癌候选物是否能够作为抗癌物质：(i)降低Tyr577上FAK 的磷酸化作用，(ii)抑制FAK结合到RhoGAP或者FAK结合到GRAF， (iii)减少细胞液p27^Kip1的表达和稳定性，(iv)增强RhoA活性，或 者(v)降低Rac1活性。

2.根据权利要求1所述的抗癌化合物的筛选方法，其特征在于， 细胞液p27^Kip1为Ser 10上磷酸化的p27^Kip1。

3.根据权利要求1所述的抗癌化合物的筛选方法，其特征在于， 步骤(b)进一步包括检测选择下组中至少一种：该组包括细胞形态，在 细胞粘着形成中涉及的蛋白质的表达，细胞-细胞接触模式或者接触生 长，α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)或者波形蛋白的表达，E-钙粘蛋白的表达， 和上皮-间叶细胞转移(EMT)；并且步骤(c)进一步包括下列事件：细胞 形态从杆状变化成多边形，降低了在细胞粘着形成中涉及的蛋白质的表 达，细胞-细胞接触的保持，细胞生长的接触抑制，降低了α-SMA或者 波形蛋白的表达，增加了E-钙粘蛋白的表达，或者降低了上皮-间叶细胞 转移(EMT)。

4.根据权利要求3所述的抗癌化合物的筛选方法，其特征在于， 细胞-细胞粘着形成中涉及的蛋白质选自下组，该组包括E-钙粘蛋白、闭 合带-1(ZO1)，β-连环蛋白和桥粒斑蛋白。

5.根据权利要求3所述的抗癌化合物的筛选方法，其特征在于， 细胞生长的接触抑制通过细胞数的减少、S-期细胞数量的减少或者多层 生长的抑制来进行。

6.根据权利要求5所述的抗癌化合物的筛选方法，其特征在于， 细胞数的减少或者S-期细胞数量的减少通过膜蛋白的N-连接的糖基化 的失活而被介导。

7.根据权利要求1或3所述的抗癌化合物的筛选方法，其特征在 于，步骤(b)进一步包括检测选自下组中的至少一种，该组包括在细胞 外基质或者血清的存在下细胞转移或者运动，侵入到包括细胞外基质的 胶原凝胶中，侵入到作为细胞外基质复合物的Matrigel中，和基质金属 蛋白酶(MMP)活性；并且步骤(c)进一步包括下列事件：在细胞外基质 或者血清的存在下降低细胞转移或者运动，降低侵入到胶原凝胶中，降 低侵入到Matrigel中，或者降低MMP活性。

8.根据权利要求7所述的抗癌化合物的筛选方法，其特征在于， 所述MMP为MMP-2或MMP-9。

9.根据权利要求1的抗癌化合物的筛选方法，其特征在于，癌细胞来 自选自下组的癌症，该组包括胰腺癌、胃癌、肝癌、结肠癌、脑瘤、乳腺癌、 甲状腺癌、膀胱癌、食道癌、子宫癌和肺癌。