[发明专利]传递方法

说明书

本申请要求2006年6月1日提交的美国第60/809,842号临时申请的优先权，其全部内容籍引用并入本申请。

本发明受美国国立卫生研究院所颁发的第R01 HL079051号基金的政府资助。政府在本发明中具有一定权利。

技术领域

总的来说，本发明涉及干扰RNA(RNAi)(例如siRNA)，特别是涉及一种有效的定向传递RNAi′s的方法，以及适于该方法的化合物。

背景技术

RNA干扰(RNAi)是一种首先由Fire等人于1998年描述的发生在线虫中的细胞机理，它是由21-23nt的双链RNA引起的同源mRNAs的降解过程(Fire等，自然(Nature)391(6669)：806-811(1998))。自从有人首先证明了外源的短干扰RNAs(siRNAs)可以在哺乳动物细胞中通过此途径使得基因表达沉默(Elbashir等，自然411(6836)：494-8(2001))以来，RNAi的治疗性应用已经显现出来。RNAi在治疗方面有吸引力的性质包括1)严格的目的基因特异性，2)siRNAs相对低的免疫原性，以及3)siRNAs设计和检验的简单性。

基于RNAi的临床应用的一个决定性的技术障碍是使siRNAs在体内通过细胞质膜进行传递。已经有许多种针对此问题的解决办法，包括阳离子脂质体(Yano等，ClinCancer Res.10(22)：7721-6(2004))，病毒载体(Fountaine等，Curr Gene Ther.5(4)：399-410(2005)，Devroe和Silver，Expert Opin Biol Ther.4(3)：319-27(2004)，Anderson等，艾滋病Res Hum Retroviruses.19(8)：699-706(2003))，高压注射(Lewis and Wolff，MethodsEnzymol.392：336-50(2005))，以及siRNAs修饰(如化学修饰，脂质体修饰，甾体修饰，以及蛋白修饰)(Schiffelers等，Nucleic Acids Res.32(19)：e149(2004)，Urban-Klein等，Gene Ther.12(5)：461-6(2005)，Soutschek等，自然432(7014)：173-8(2004)，Lorenz等，Bioorg Med Chem Lett.14(19)：4975-7(2004)，分钟akuchi等，Nucleic Acids Res.32(13)：e109(2004)，Takeshita等，Proc Natl Acad Sci USA.102(34)：12177-82(2005))。但是，至今所描述的大部分方法都具有不考虑细胞类型而使siRNAs传递到非特异性细胞中的缺点。

对于体内应用来说，将治疗性siRNA试剂定位于特定的细胞类型(例如癌细胞)是非常重要的，由此可以减少由非特异性传递所引起的副作用，同时也可以减少出于成本原因所要重点考虑的治疗所必需的siRNA数量。一项最近的研究揭示了一种有希望将siRNAs定向传递的方法，其中，结合特异细胞表面受体的抗体与精蛋白融合，用于通过内吞作用而将siRNAs传递到细胞内(Song等，Nat.Biotechnol.23(6)：709-17(2005))。

本发明涉及一种非常简单的特异性传递siRNAs的方法，其中至少在一个实施例中，只用到了RNA的性质。利用SELEX(指数富集配基的系统进化技术)，我们已经证明了结构性RNAs能够以高亲和性结合各种蛋白质，而且其特异性也已经被证实。本发明的传递方法利用核酸(例如RNA)的结构潜势使siRNAs定位于特定的细胞表面受体上，并由此定位于特定的细胞类型上。因此，本发明提供了一种特异性传递核酸的方法，该核酸包括一个定位部分(例如，一种适体)，和一个RNA沉默部分(例如，一种siRNA)，该部分被Dicer酶所识别，并以类似于加工微小RNAs(microRNAs)的方式发生作用。

发明内容

发明概要

本发明涉及干扰RNA(RNAi)，并涉及一种传递干扰RNA的方法。更准确地说本发明涉及一种有效的定向传递siRNA的方法，包括利用含有要传递的siRNA的和一个定位部分的核酸，其中该定位部分是一种适体。

本发明的目的和优点将在下面的说明中予以阐明。

附图说明