[发明专利]酯解毒的方法

权利要求书

1.一种解毒方法，该方法包括将丁酰胆碱酯酶(BchE)与有机磷酸酯制剂、滥用的药物、除草剂或杀虫剂相接触。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述接触发生在体内。

3.如权利要求1所述的方法，其中所述接触发生在体外。

4.如权利要求1所述的方法，其中所述有机磷酸酯制剂为选自沙林、梭曼、GF、塔崩和VX的神经毒剂。

5.如权利要求1所述的方法，其中所述有机磷酸酯制剂为选自化合物1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12和13的化合物。

6.如权利要求1所述的方法，其中所述滥用的药物为可卡因。

7.一种针对丁酰胆碱酯酶(BchE)活性筛选化合物的方法，该方法包括以下步骤：

a)将BchE与所述化合物进行孵育；并

b)检测BchE的抑制作为所述化合物的生物或药理活性的指标。

8.如权利要求7所述的方法，其中所述BchE为恒河猴BchE或其变体。

9.如权利要求7所述的方法，其中所述化合物选自化合物1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12和13。

10.一种在载体中制备BchE突变库的方法。

11.如权利要求10所述的方法，其中所述载体为pENTRA或腺病毒载体。

12.如权利要求10所述的方法，其中所述BchE为恒河猴BchE或其变体。

13.如权利要求10所述的方法，其中所述BchE为人BchE或其变体。

14.如权利要求10所述的方法，其中所述BchE为恒河猴BchE和人BchE或其变体的混合物。

15.一种通过将BchE突变库包装在腺病毒颗粒中用重组腺病毒感染哺乳动物细胞的方法。

16.如权利要求15所述的方法，其中所述BchE为恒河猴BchE或其变体。

17.如权利要求15所述的方法，其中所述BchE为人BchE或其变体。

18.如权利要求15所述的方法，其中所述BchE为恒河猴BchE和人BchE或其变体的混合物。

19.一种检测如权利要求9所述的被感染的哺乳动物细胞的培养基中BchE表达的方法，该方法包括以下步骤：

a)收集感染后培养基；以及

b)分析所述培养基中的BchE活性。

20.如权利要求19所述的方法，其中所述BchE活性采用Ellman法或western印迹分析进行分析。

21.如权利要求19所述的方法，其中所述BchE为恒河猴BchE或其变体。

22.如权利要求19所述的方法，其中所述BchE为人BchE或其变体。

23.如权利要求19所述的方法，其中所述BchE为恒河猴BchE和人BchE或其变体的混合物。

24.一种检测表达BchE的原核或真核细胞中的BchE的方法，该方法包括以下步骤：

a)在选自化合物1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12和13的有机磷酸酯化合物的存在下，用含琼脂糖的培养基覆盖所述细胞；

b)将步骤(a)的混合物孵育不同的时间长度；并

c)在碘化丁酰硫代胆碱和DTNB的存在下，在含琼脂糖的覆盖缓冲液中检测BchE活性。

25.如权利要求24所述的方法，其中所述BchE为恒河猴BchE或其变体。

26.如权利要求24所述的方法，其中所述BchE为人BchE或其变体。

27.如权利要求24所述的方法，其中所述BchE为恒河猴BchE和人BchE或其变体的混合物。