[发明专利]抗体制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及制备抗体的方法和用该方法制备的抗体。

背景技术

抗体是一类应用于许多不同领域的治疗性分子，应用领域包括移 植、心血管疾病、感染性疾病、癌症和自身免疫性疾病。杂交瘤技术 的发展可将单克隆抗体(亦称为MAb)分离，用作候选的治疗性分子。 现在，单克隆抗体构成了快速增长的一类治疗方法，部分原因是由于 其可预见的药物代谢动力学特性，其在临床上成功率高，以及其拮抗 大蛋白质-蛋白质之间相互作用的能力。

趋化因子(chemoattractant)受体是一类促进细胞迁移的G蛋白偶 联受体(Gerard & Gerard(1994a和b)；Murphy(1994))。这些受体 引起众多制药公司的兴趣，是因为它们通常能够被有机小分子抑制， 阻断这些受体或其配体能改善各种炎症状态，至少在动物模型中是这 样(Mackay(2001)；von Andrian & Mackay(2000)；以及Luster等人 (2005))。在许多炎症条件下发挥关键作用的一个受体是C5a受体 (C5aR)(Gerard & Gerard(1994b)；Guo & Ward(2005)；Riedemann 等人(2003)；Ji等人(2002))。对于C5aR拮抗剂的开发付出相当大 的努力，包括有机小分子和肽类拮抗剂(Sumichika(2004)；Allegretti 等人(2005))。尽管如此，开发C5aR和其他趋化因子受体的适合的小 分子拮抗剂尚存疑问。

最近，已证明单克隆抗体(mAb)可用作有用试剂以拮抗趋化因 子受体，以及鉴定趋化因子(chemokine)/配体结合或HIV-1结合的 重要区域(Heath等人(1997))。然而，过去已经证明很难产生趋化因 子受体的高亲和力的拮抗性单克隆抗体。因此，有必要改进抗多肽如G 蛋白偶联受体和趋化因子受体的高亲和力抗体的制备方法。

发明概要

本发明人现在已经发现，通过将源自转基因小鼠的细胞为野生型 小鼠进行免疫接种，表达人类多肽的转基因小鼠能用于开发抗人多肽 的高亲和力拮抗性单克隆抗体。

因此，本发明提供了制备针对第一物种多肽的方法，该方法包括：

用第二物种哺乳动物的转基因细胞为第二物种哺乳动物进行免疫 接种，其中第一物种多肽通过源自转基因哺乳动物的细胞表达。

在优选具体实施方式中，第一物种多肽在源自转基因哺乳动物的 细胞表面表达。

在更优选具体实施方式中，该方法包括从免疫的哺乳动物的细胞， 优选脾细胞中制备杂交瘤细胞的额外的步骤。优选地，该方法进一步 包括筛选杂交瘤细胞以得到与第一物种多肽结合的抗体。

在本发明的优选具体实施方式中，抗体是单克隆抗体。本发明还 包括源自本发明制备的抗体的重组或人源化抗体。

在本发明的优选具体实施方式中，第一物种是驯化动物、家畜或 人。更优选地，第一物种是人。

在进一步优选的具体实施方式中，第二物种选自牛、猪、山羊、 绵羊、骆驼、马、猫、狗、猴、狒狒、兔、豚鼠、大鼠、仓鼠和小鼠。 啮齿动物，如大鼠、小鼠和仓鼠是优选的的第二物种哺乳动物。更优 选地，第二物种是小鼠。

应该意识到，第一物种多肽可以是任何治疗或诊断的靶标。例如， 多肽可以是G蛋白偶联受体。在优选具体实施方式中，G蛋白偶联受 体是趋化因子受体。趋化因子受体优选是C5aR。

在另一具体实施方式中，已经将编码多肽的核酸分子进行遗传修 饰以使转基因哺乳动物细胞的多肽表达增强。

在进一步优选的具体实施方式中，源自转基因哺乳动物的细胞是 那些高水平表达第一物种多肽的细胞。因此优选的细胞类型取决于多 肽的性质。例如，如果多肽在肝脏中天然高表达，源自转基因哺乳动 物的细胞优选是肝细胞。另外，如果多肽影响免疫调节或炎症应答， 则细胞类型优选是免疫系统的细胞，如抗原呈递细胞。合适的抗原呈 递细胞的例子包括：树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、中性粒细胞、 嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、成纤维细胞、肥大细胞、T细胞和B 细胞。

在另一个进一步优选的具体实施方式中，源自转基因哺乳动物的 细胞是那些已进行遗传修饰以高水平表达第一物种多肽的细胞。

本发明还提供了通过本发明的方法制备的抗体。