[发明专利]用于增加转录的基质附着区（MAR）及其应用

权利要求书

1.用于高水平表达至少一种基因的一种表达系统，包括：

用于可操作地连接编码一种感兴趣基因的一种核苷酸序 列的一种启动子，以及在一种用所述表达系统转化的细胞内用 于增强一种所述基因表达的至少一种非人类哺乳动物MAR 核苷酸序列，其中用所述构建体转化所述细胞时，所述非人类 哺乳动物MAR核苷酸序列使所述基因表达增加约2、约3、 约4、约5、约6、约7、约8、约9、约10倍或更多倍。

2.根据权利要求1所述的表达系统，其中包括所述启动子和编码 一种感兴趣基因的所述核苷酸序列的一种表达盒可操作地连 接于该启动子。

3.根据以上权利要求中任一项所述的表达系统，其中所述至少一 种非人类哺乳动物MAR核苷酸序列是一种啮齿动物MAR核 苷酸序列，例如一种小鼠或仓鼠MAR核苷酸序列。

4.根据以上权利要求中任一项所述的表达系统，其中所述非人类 哺乳动物MAR核苷酸序列包括：

(i)SEQ ID No.3、SEQ ID No.10或它的一个功能片段； 或者

(ii)与(i)中任何一个序列具有约80％，约90％，约 95％或约98％的序列一致性的一种核苷酸序列。

5.根据以上权利要求中任一项所述的表达系统，其中所述基因在 一种非人类哺乳动物细胞例如一种啮齿动物细胞特别是一种 小鼠或仓鼠细胞或者在一种人类细胞如一种HeLa细胞内表 达。

6.根据以上权利要求中任一项所述的表达系统，其中所述至少一 种非人类哺乳动物MAR核苷酸序列在所述基因上以顺式或反 式发挥作用。

7.用于增加在一种细胞内蛋白质产量的一种方法，包括 提供一种人类或非人类哺乳动物细胞，

将以上权利要求中任一项所述的表达系统导入所述细胞 内，使基因表达增加约2、约3、约4、约5、约6、约7、约 8、约9、约10倍或更多。

8.一种分离并纯化的核酸分子，包括：

(a)SEQ ID No.3或SEQ ID No.10或它的一个功能片 段的核苷酸序列，或者

(b)与(a)中的序列具有至少约80％、约90％、约95％ 或约98％的序列一致性且具有MAR活性的一种核苷酸序列。

9.用于鉴定非人类哺乳动物MAR序列的一种方法，包括：

提供至少一种非人类哺乳动物核酸分子，优选一种非人 类哺乳动物基因组或其一部分，

令所述核酸分子经受针对MAR序列的一个扫描过程，包 括：

设定待评估的核酸分子的窗口大小，

选择至少1个或至少2个，优选3个，更优选4个或更 多个与MAR相关的特征，

为表现这个/这些特征的序列设定多个阈值，以及

选择超过这些阈值的MAR候选核苷酸序列，

确定通过包含所述非人类哺乳动物MAR核苷酸序列的 一种表达系统转化一种人和/或非人类哺乳动物细胞时，所述 非人类哺乳动物MAR核苷酸序列使基因表达增加约2、约3、 约4、约5、约6、约7、约8、约9、约10倍或更多倍。

10.根据权利要求9所述的一种方法，其中所述至少一个特征可以 是一个DNA弯曲角度、大沟深度、小沟宽度、解链温度或它 们的组合。

11.根据权利要求10所述的方法，其中DNA弯曲角度值包括在 约3和约5度(基团的角度(radical degree))之间，优选在 3.8和约4.4度之间，包括约3.9、约4.0、约4.1、约4.2和约 4.3度。

12.根据权利要求10或11所述的方法，其中大沟深度值在约8.9 至约之间并且小沟宽度值在约5.2至约之间，优选 地，该大沟深度值在约9.0至约之间包括约并且该 小沟宽度值可在约5.4至约之间包括约和约