[发明专利]用于通过检测网格蛋白途径成分的片段来观察凋亡的方法和材料

权利要求书

1.一种用于观察哺乳动物细胞中凋亡的试剂盒，该试剂盒包含：

a)第一抗体，其结合AP2-α(SEQ ID NO：1)的蛋白质片段，

b)第二抗体，其结合AP2-α(SEQ ID NO：1)的蛋白质片段，其中所述 第一和第二抗体不结合相同的蛋白质，其中所述蛋白质片段由SEQ  ID NO：1的氨基酸1-687或SEQ ID NO：1的氨基酸688-955组成；

c)(a)和(b)的容器，

d)说明书，其关于使用所述试剂盒中的所述抗体来观察哺乳动物细胞 中的凋亡。

2.结合凋亡过程中所产生的蛋白质片段的抗体在制备用于在哺乳动物细 胞中检测凋亡的试剂盒中的用途，其中所述检测包括：

(a)使所述细胞与所述结合凋亡过程中所产生的蛋白质片段的抗体接 触，其中所述抗体结合AP2-α(SEQ ID NO：1)的蛋白质片段，其中 所述蛋白质片段由SEQ ID NO：1的氨基酸1-687或SEQ ID NO：1的 氨基酸688-955组成；

(b)测定凋亡过程中所产生的所述蛋白质片段所结合的所述抗体量；和

(c)比较步骤(b)中所结合的所述抗体量与无凋亡的哺乳动物细胞中所 述蛋白质片段所结合的所述抗体量，其中如果步骤(b)中的所述量大 于无凋亡的细胞中的所述量，那么检测出凋亡。

3.权利要求2的用途，其中所述细胞中的凋亡是经由死亡受体4(SEQ ID  NO：5)、死亡受体5(SEQ ID NO：6)或Fas(SEQ ID NO：8)启动的。

4.权利要求3的用途，其中所述细胞中的凋亡是通过使所述细胞与 Apo2L／TRAIL(SEQ ID NO：7)、FasL(SEQ ID NO：9)、Fas激动性抗体、 DR4激动性抗体或DR5激动性抗体接触而启动的。

5.权利要求4的用途，其中所述检测还包括使用凋亡检测以获得关于疗法 功效的信息的步骤，所述疗法包括施用Apo2L／TRAIL(SEQ ID NO：7)、 FasL(SEQ ID NO：9)、Fas激动性抗体、DR4激动性抗体或DR5激动性抗 体。

6.权利要求2的用途，其中所述细胞是人结肠、结肠直肠、肺、乳腺、前 列腺、膀胱、肾、卵巢、脑、黑素瘤、白血病或骨髓瘤癌细胞。

7.权利要求2的用途，其中使用免疫印迹法、酶联免疫吸附测定法或免疫 组织化学来观察AP2-α(SEQ ID NO：1)的蛋白质片段。

8.权利要求2的用途，其中所述检测还包括在所述哺乳动物细胞中检查至 少一种mRNA的表达。

9.权利要求2的用途，其中所述检测还包括：在使所述细胞与所述抗体接 触之前，使所述哺乳动物细胞暴露于一种或多种测试药剂，使得在所述 哺乳动物细胞中检测出凋亡则所述一种或多种测试药剂鉴定为所述哺 乳动物细胞中的凋亡诱导物。

10.结合凋亡过程中所产生的蛋白质片段的抗体在制备用于鉴定对在人癌 细胞中诱导凋亡的治疗剂可能发生响应或为响应性的人癌细胞的试剂 盒中的用途，其中所述鉴定包括：

使所述人癌细胞暴露于所述治疗剂；

用所述结合凋亡过程中所产生的蛋白质片段的抗体对暴露于所述治疗 剂的所述人癌细胞检查AP2-α(SEQ ID NO：1)的蛋白质片段的存 在，其中所述蛋白质片段由SEQ ID NO：1的氨基酸1-687或SEQ ID  NO：1的氨基酸688-955组成；

比较所述人癌细胞中所述蛋白质片段的量与未暴露于所述治疗剂的对 照人癌细胞中所述蛋白质片段的量；

其中：

若存在于暴露于所述治疗剂的所述人癌细胞中的所述蛋白质片段量大 于未暴露于所述治疗剂的所述对照人癌细胞中的所述蛋白质片段 量，则观察到凋亡；且

在所述人癌细胞中观察到凋亡则所述人癌细胞鉴定为对所述治疗剂可 能发生响应或为响应性的。