[发明专利]用于纯化高分子量透明质酸的有效方法无效

专利信息
申请号: 200780033000.X 申请日: 2007-07-06
公开(公告)号: CN101512006A 公开(公告)日: 2009-08-19
发明(设计)人: V·兰加斯瓦米;V·桑托什;J·达门德拉;V·纳塔拉;H·维兰卡;A·卡帕特 申请(专利权)人: 利莱恩斯生命科学有限公司
主分类号: C12P19/26 分类号: C12P19/26;C08B37/00
代理公司: 中国专利代理(香港)有限公司 代理人: 权陆军;付 磊
地址: 印度马哈*** 国省代码: 印度;IN
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摘要:
搜索关键词: 用于 纯化 分子量 透明 有效 方法
【权利要求书】:

1.生产透明质酸(HA)或它的盐的方法,该方法包含:

(a)提供能生产HA的链球菌细菌;

(b)提供营养培养基来培养细菌,其中所述营养培养基包含二价锌 离子盐、1%酪蛋白水解物和5%选自乳糖和蔗糖的碳源;

(c)在营养培养基中培养细菌;和

(d)在需氧条件下发酵营养培养基,

其中所述透明质酸具有至少100万Da的分子量。

2.权利要求1的方法,其中所述发酵是连续的。

3.权利要求1的方法,其中所述盐是ZnSO4

4.权利要求1的方法,其中在30-40℃的温度、300-500rpm的搅拌 速率、1-3vvm的通气和中性pH,进行所述发酵步骤至少15个小时。

5.权利要求1的方法,其中所述HA具有在约3.5x106Da至4.0x106Da范围内的分子量,且该方法生产产量为至少5g高分子量HA/升营养 培养基。

6.权利要求5的方法,其中发酵24小时后,HA的分子量是至少 3x106Da。

7.权利要求1的方法,其中所述细菌选自:兽瘟链球菌、马链球菌 和酿脓链球菌。

8.权利要求7的方法,其中所述细菌是兽瘟链球菌。

9.生产透明质酸(HA)或它的盐的方法,该方法包含:

(a)提供能生产HA的链球菌细菌;

(b)提供营养培养基来培养微生物源,其中所述营养培养基包含二 价锌离子盐、1%酪蛋白水解物和5%选自乳糖和蔗糖的碳源;

(c)在营养培养基中培养细菌;

(d)在需氧条件下发酵营养培养基,

(e)稀释和澄清营养培养基;

(f)用溶剂沉淀在稀释的培养基中存在的HA;

(g)将沉淀的HA或它的盐溶于溶液;

(h)将硅胶加入来自步骤(g)的HA溶液或HA盐溶液,然后去除硅 胶;

(i)用活性炭处理来自步骤(h)的HA溶液或HA盐溶液;和

(j)使用溶剂渗滤来自步骤(i)的HA溶液或HA盐溶液;

其中在没有任何去污剂或表面活性剂或福尔马林存在下和在中性 pH进行该方法;

其中所述HA具有至少100万Da的分子量。

10.生产透明质酸(HA)或它的盐的方法,该方法包含:

(a)提供能生产HA的链球菌细菌;

(b)提供营养培养基来培养细菌,其中所述营养培养基包含锌、浓 度为10g/L的酪蛋白水解物和浓度为50g/L的选自乳糖和蔗糖的碳源;

(c)在营养培养基中培养细菌;和

(d)在需氧条件下发酵营养培养基,

其中所述透明质酸具有至少100万Da的分子量。

11.通过权利要求1或6的方法生产的透明质酸或它的盐。

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