[发明专利]用于脊椎动物细胞的杂合抑制tRNA

权利要求书

1.一种非人类脊椎动物细胞，其包含大肠杆菌的酪氨酰-tRNA合成酶、由SEQ ID NO:88所编码的正交tRNA、选自对-乙酰基-苯丙氨酸以及对-叠氮基-苯丙氨酸的非天然氨基酸以及包含编码所关注多肽的多聚核苷酸的核酸，其中所述多聚核苷酸包含由所述正交tRNA识别的选择性密码子，所述非人类脊椎动物细胞是CHO K1细胞，所述大肠杆菌的酪氨酰tRNA合成酶在所述CHO K1细胞中优先利用所述非天然氨基酸将所述正交tRNA氨酰化，且所述CHO K1细胞于非天然氨基酸存在下产生所关注的多肽。

2.根据权利要求1所述的非人类脊椎动物细胞，其中所述CHO K1细胞已经稳定转染。

3.根据权利要求1所述的非人类脊椎动物细胞，其中所述CHO K1细胞已经瞬时转染。

4.一种在非人类脊椎动物细胞中产生至少一种包含至少一个非天然氨基酸的蛋白质的方法，所述方法包含：

使包含核酸的非人类脊椎动物细胞在适当培养基中生长，其中所述非人类脊椎动物细胞是CHO K1细胞，所述核酸包含至少一个选择性密码子且编码所述蛋白质；所述培养基包含选自对-乙酰基-苯丙氨酸以及对-叠氮基-苯丙氨酸的非天然氨基酸且所述CHO K1细胞包含：

正交tRNA，其是由核苷酸序列SEQ ID NO:87所组成，所述核苷酸序列在所述CHO K1细胞中起作用并识别所述选择性密码子；和

大肠杆菌的酪氨酰tRNA合成酶，其优先利用所述非天然氨基酸将所述由核苷酸序列SEQ ID NO:87所组成的正交tRNA氨酰化。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述CHO K1细胞已经稳定转染以包含所述正交tRNA和所述大肠杆菌的酪氨酰tRNA合成酶。

6.根据权利要求4所述的方法，其中所述CHO K1细胞已经瞬时转染以包含所述正交tRNA和所述大肠杆菌的酪氨酰tRNA合成酶。