[发明专利]选择性硫酸化的蛋白质在真细菌中的遗传编程表达

权利要求书

1.一种翻译系统，其包含： 

(a)第一非天然氨基酸，即磺基酪氨酸； 

(b)第一正交氨酰基-tRNA合成酶(O-RS)，所述第一O-RS由SEQ ID NO:4、6、8或10所示氨基酸序列构成；和 

(c)第一正交tRNA(O-tRNA)； 

其中所述第一O-RS用所述磺基酪氨酸优先氨酰化所述第一O-tRNA。 

2.如权利要求1所述的翻译系统，其特征在于，所述第一O-RS衍生自詹氏甲烷球菌氨酰基-tRNA合成酶。 

3.如权利要求1所述的翻译系统，其特征在于，所述第一O-RS衍生自野生型詹氏甲烷球菌酪氨酰-tRNA合成酶。 

4.如权利要求1所述的翻译系统，其特征在于，所述第一O-tRNA是琥珀抑制子tRNA。 

5.如权利要求1所述的翻译系统，其特征在于，所述第一O-tRNA由SEQ ID NO:1所示多核苷酸序列构成或由其编码。 

6.如权利要求1所述的翻译系统，还包括编码感兴趣蛋白质的核酸，所述核酸含有至少一个选择者密码子，其中所述选择者密码子为所述第一O-tRNA识别。 

7.如权利要求6所述的翻译系统，还包括第二O-RS和第二O-tRNA，其中所述第二O-RS用不同于所述第一非天然氨基酸的第二非天然氨基酸优先氨酰化所述第二O-tRNA，其中所述第二O-tRNA识别不同于所述第一O-tRNA识别的选择者密码子的选择者密码子。 

8.如权利要求1所述的翻译系统，其特征在于，所述系统包括含有所述第一非天然氨基酸、所述第一O-RS和所述第一O-tRNA的宿主细胞。 

9.如权利要求8所述的翻译系统，其特征在于，所述宿主细胞是真细菌细胞。 

10.如权利要求9所述的翻译系统，其特征在于，所述真细菌细胞是大肠杆菌细胞。 

11.如权利要求8所述的翻译系统，其特征在于，所述宿主细胞含有 编码所述第一O-RS的多核苷酸。 

12.如权利要求11所述的翻译系统，其特征在于，所述多核苷酸由SEQID NO:5、7、9或11所示核苷酸序列构成。 

13.如权利要求8所述的翻译系统，其特征在于，所述宿主细胞包含编码所述第一O-tRNA的多核苷酸。 

14.一种在翻译系统内产生在选择位置上含有非天然氨基酸的蛋白质的方法，所述方法包括： 

(a)提供一种翻译系统，其包含： 

(i)第一非天然氨基酸，即磺基酪氨酸； 

(ii)第一正交氨酰基-tRNA合成酶(O-RS)，所述O-RS由SEQ ID NO:4、6、8或10所示氨基酸序列构成； 

(iii)第一正交tRNA(O-tRNA)，其中所述第一O-RS用所述磺基酪氨酸优先氨酰化所述第一O-tRNA；和 

(iv)编码所述蛋白质的核酸，其中所述核酸包含所述第一O-tRNA识别的至少一个选择者密码子；和 

(b)在所述蛋白质的翻译过程中对所述选择者密码子起反应而将所述非天然氨基酸掺入所述蛋白质的所述选择位置，从而产生在选择位置含有所述非天然氨基酸的所述蛋白质。 

15.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述包含非天然氨基酸的蛋白质是磺基蛭素。 

16.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述提供翻译系统包括提供编码所述O-RS的多核苷酸。 

17.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述提供翻译系统包括提供编码所述O-tRNA的多核苷酸。 

18.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述提供翻译系统包括提供O-tRNA，该O-tRNA是琥珀抑制子tRNA。 

19.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述提供翻译系统包括提供由SEQ ID NO:1所示多核苷酸序列构成或由其编码的O-tRNA。