[发明专利]分析物和核酸的检测

说明书

本申请要求于2006年8月1日递交的美国临时申请第60/835,118号 的利益。通过引用方式将美国临时申请第60/835,118号的全部内容并入 本文以用于所有目的。

技术领域

本发明提供了检测样品中的至少一种分析物和至少一种核酸的方 法。本发明还提供了用于实施所述方法的试剂。

背景技术

包括Western印记、ELISA等各种检测细胞裂解物中的蛋白质的方 法是本领域中已知的。包括RT-PCR等各种检测细胞裂解物中的核酸的方 法也是本领域中已知的。然而，样品中所检测的蛋白质和所检测的核酸 的相对量难于比较，这是因为这些样品通常是分别地、以不同方法制备 的。另外，用于蛋白质和核酸的不同检测方法也会给关联它们的相对量 带来困难。

发明内容

在各种实施方式中，提供了检测细胞中的至少一种目标分析物和至 少一种目标核酸的方法。在各种实施方式中，提供了以下的方法，所述 方法包括：在多功能性裂解缓冲液中裂解细胞从而产生细胞裂解物、利 用近感检测测定法(proximity detection assay)检测所述细胞裂解物中的至 少一种目标分析物、和利用核酸定量检测测定法检测所述细胞裂解物中 的至少一种目标核酸。在各种实施方式中，检测至少一种目标分析物和 检测至少一种目标核酸是在同一容器中进行的。

在各种实施方式中，提供了以下的方法，所述方法包括：在多功能 性裂解缓冲液中裂解细胞从而产生细胞裂解物，将所述细胞裂解物与以 下物质(i)、(ii)和(iii)温育：(i)至少一个近感检测探针组，其中每个近感检 测探针组包括至少两种近感检测探针，并且其中每种近感检测探针包含 至少一种分析物结合部分和至少一种寡核苷酸部分；(ii)至少一种夹板寡 核苷酸(splint oligonucleotide)；和(iii)至少一种连接酶，由此形成至少一个 经连接的近感检测探针组；将所述细胞裂解物与至少一种蛋白酶温育； 检测所述至少一个经连接的近感检测探针组；和检测至少一种目标核酸。

在各种实施方式中，提供了以下的方法，所述方法包括：在多功能 性裂解缓冲液中裂解细胞从而产生细胞裂解物，将所述细胞裂解物与至 少一个近感检测探针组温育，其中每个近感检测探针组包括至少两种近 感检测探针，并且其中每种近感检测探针包含至少一种分析物结合部分 和至少一种寡核苷酸部分，由此形成至少一个经杂交的近感检测探针组； 将所述细胞裂解物与至少一种蛋白酶温育；检测所述至少一个经杂交的 近感检测探针组；和检测至少一种目标核酸。

在各种实施方式中，提供了多功能性裂解缓冲液。在各种实施方式 中，多功能性裂解缓冲液包含选自NDSB-201、LDAO、CHAPS、DEDTAB、 Zwittergent 3-10和CAPSO中的至少一种化学品。

在各种实施方式中，提供了用于检测至少一种目标分析物和至少一 种目标核酸的试剂盒。在各种实施方式中，试剂盒包含含有至少一种化 学品的至少一种多功能性裂解缓冲液，所述至少一种化学品选自 NDSB-201、LDAO、CHAPS、DEDTAB、Zwittergent 3-10和CAPSO。

在各种实施方式中，提供了包含裂解液的组合物，其中所述裂解液 包含多功能性裂解缓冲液和至少一个近感检测探针组，所述多功能性裂 解缓冲液含有选自NDSB-201、LDAO、CHAPS、DEDTAB、Zwittergent 3-10 和CAPSO中的至少一种化学品。

附图说明

图1显示了实施例1中所述的近感连接测定法的结果。其中给出了 每种反应的循环阈值数(“平均CT”)。

图2显示了对于实施例1所述的TaqMan一步qRT-PCR反应的荧光 的相对增加(ΔRn)对循环数的图。图2中只显示了FAM层。

图3显示了对于实施例1所述的实验的循环阈值数对平板定位(即 TaqMan一步qRT-PCR反应)的图。图3中只显示了FAM层。

图4显示了对于实施例1所述的TaqMan一步qRT-PCR反应的荧光 相对增加(ΔRn)对循环数的图。图4中只显示了VIC层。

图5显示了对于实施例1所述的实验的循环阈值数对平板定位(即 TaqMan一步qRT-PCR反应)的图。图5中只显示了VIC层。