[发明专利]源于大鼠及其它动物的多潜能细胞

权利要求书

1.一种培养大鼠ES细胞的方法，包括在含有N2B27基础培养基、浓度从0.1μM 到5μM的PD184352、浓度从0.1μM到20μM的CHIR99021以及浓度从 0.5μM到10μM的SU5402的培养基中培养大鼠ES细胞。

2.权利要求1所述的培养大鼠ES细胞的方法，特征在于所述大鼠ES细胞表达 Nanog、Oct4、FGF4和Sox-2中的两或多个。

3.权利要求2所述培养大鼠ES细胞的方法，特征在于所述大鼠ES细胞表达 Nanog、Oct4和Sox-2。

4.权利要求2或3所述的培养大鼠ES细胞的方法，特征在于所述大鼠ES细胞 还表达碱性磷酸酶。

5.权利要求2所述培养大鼠ES细胞的方法，特征在于所述大鼠ES细胞表达 Rex1、Stella、FGF4和Sox-2。

6.权利要求2所述培养大鼠ES细胞的方法，特征在于所述大鼠ES细胞不表达 FGF5。

7.权利要求2所述培养大鼠ES细胞的方法，特征在于所述大鼠ES细胞在培养 基中形态学上未分化。

8.权利要求2所述培养大鼠ES细胞的方法，特征在于所述大鼠ES细胞可在培 养基中被维持两星期或更长。

9.权利要求2所述培养大鼠ES细胞的方法，特征在于所述大鼠ES细胞可在培 养基中被维持6个月或更长。

10.权利要求8或9所述培养大鼠ES细胞的方法，特征在于在被培养后，所述 大鼠ES细胞的后代细胞保留原始大鼠ES细胞的特性。

11.权利要求2所述培养大鼠ES细胞的方法，特征在于所述大鼠ES细胞可形成 嵌合体。

12.权利要求11所述培养大鼠ES细胞的方法，特征在于嵌合体中的所有细胞均 是大鼠细胞。

13.权利要求11或12所述培养大鼠ES细胞的方法，特征在于所述大鼠ES细胞 可形成嵌合体种系。

14.权利要求2所述培养大鼠ES细胞的方法，特征在于所述大鼠ES细胞可形成 畸胎瘤或畸胎癌，且形成的畸胎瘤或畸胎癌中含有源于所有三个胚层的分化 细胞。

15.权利要求2所述培养大鼠ES细胞的方法，特征在于所述细胞在培养基中可 作为单个细胞生长和/或增殖。

16.权利要求2所述培养大鼠ES细胞的方法，特征在于在激活素和/或FGF存在 时，所述大鼠ES细胞被诱导分化或停止生长。

17.权利要求2所述培养大鼠ES细胞的方法，特征在于所述大鼠ES细胞的分化 不是由激活素受体被封闭所诱导的。

18.获得大鼠ES细胞的方法，包括：

(1)在含有浓度从0.1μM到5μM的PD184352、浓度从0.1μM到20μM的 CHIR99021以及浓度从0.5μM到10μM的SU5402的N2B27基础培养基中 培养胚泡，以得到内细胞团；

(2)分离并解离内细胞团中的原代扩展物；

(3)从内细胞团的原代扩展物的解离物中分选单个或许多细胞；和

(4)在含有浓度从0.1μM到5μM的PD184352、浓度从0.1μM到20μM的 CHIR99021和浓度从0.5μM到10μM的SU5402的N2B27基础培养基中培 养分选的单个或许多细胞。

19.一种获得大鼠ES细胞的方法，包括：

(1)培养胚泡以得到内细胞团；

(2)解离所述内细胞团；

(3)从解离的内细胞团中分选一个或许多细胞；和

(4)在含有浓度从0.1μM到5μM的PD184352、浓度从0.1μM到20μM的 CHIR99021和浓度从0.5μM到10μM的SU5402的N2B27基础培养基中培 养分选的单个或许多细胞。