[发明专利]肽合成的方法

说明书

技术领域

本发明涉及固相肽合成领域，特别涉及在固相合成中通过将保护的氨基酸如Fmoc-氨基酸连接至扩展肽的游离N-末端以构建肽的改良方法。

背景技术

已知大氨基酸，特别是精氨酸、高精氨酸和去甲精氨酸(norarginine)比其它氨基酸更难以偶联至扩展中的肽链。该问题存在于多数常用的偶联剂，并在固相合成中更为严重，在固相合成中树脂表面可能带来额外的空间阻力。一般而言，该问题可通过使用比标准量更高数量的待偶联氨基酸或寡肽，特别是通过重复偶联循环得以克服。当然，该种过量使用多种试剂的方法将导致昂贵试剂的大量浪费。

Di Bello等人(Semisynth.Pept.Proteins，Pap.Int.Meet.ProteinSemisynth.，会议时间1977，＂coupling of arginine peptides＂，1978，373-379)使用标准N，N′-二环己基碳二亚胺(DCC)偶联化学物检查了这一问题，详述了实验数据并测试了用于将二肽Z-Phe-Arg-OH或Boc-Glu(OBzl)-Arg-OH偶联至与Merrifield聚苯乙烯树脂连接的保护的戊聚体或九聚体的N-末端的不同偶联辅剂。所有的偶联在室温下进行。通过偶联剂DCC得到了最佳的结果，且添加剂1-羟基-苯并三唑(HOBt)带来了定量产率。该方法的缺陷是必然要求二肽和寡聚体在N，N-二甲基甲酰胺中以5:1的摩尔比例重复偶联。

然而，尽管使用HOBt，相对高水平的外消旋化形成了碳二亚胺偶联剂的多种缺陷，导致了随后形成完全不同偶联剂，如Jiang等人，Tetrahedron 1998，54，14233-14254综述的O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸(HBTU)或苯并三唑-1-基氧基-三(三甲氨基)磷六氟磷酸(BOP)。

根据Nishimura等人，Chem.Pharm.Bull.1976，24，1568-1575，为解决大精氨酸或高精氨酸偶联的问题，可通过，例如，将空间需求更小的鸟氨酸偶联至肽链，然后(即，在最后的偶联步骤之后，并在总体脱保护之前)通过胍基化(guanidation)将所述鸟氨酸转化为精氨酸。该方法的缺陷是牵涉了附加的化学反应步骤，从而提高了杂质水平。另一种不利作用是需要一种挑战保护策略，因为为了进行后续胍基化，鸟氨酸必须被能够根据需要特异性裂解的正交保护基团所封闭。最后，胍基化在从该树脂裂解之后进行。然而，传统的聚苯乙烯树脂，例如Wang树脂和Rink树脂通常需要严格的裂解条件，导致肽不利地被部分或完全脱保护。

因此，非常需要将大氨基酸与赖氨酸残基或其同族体偶联的方法，从而使包含该种引起兴趣的基序的肽可达到工业规模。一种感兴趣的肽是显示了抗微生物和抗菌活性的抗感染阳离子“indolicidin”Ile-Leu-Arg-Trp-Pro-Trp-Trp-Pro-Trp-Arg-Arg-Lys-NH₂。该种阳离子抗感染肽由于其C-末端酰胺化形式而通常更具活性。US-A1-2003/0219854披露了作为广谱抗微生物物质的indolicidin及其进一步的衍生物，其可帮助克服病原微生物对标准抗生素的多重抗药性的迅速传播。indolicidin的序列显示了在实现可接受的偶联产率上的实际挑战，因为两个精氨酸残基需要被偶联至第一赖氨酸。

发明内容

因此，本发明的目标是设计能够克服固相肽合成中与精氨酸残基或其类似物的偶联问题，特别是在将精氨酸或其同族体偶联至对空间有同样要求的赖氨酸或赖氨酸同族体时的偶联问题的方法。根据本发明，通过采用侧链锚定策略，令人惊讶地解决了低偶联效率的问题。本发明通过避免固相合成中不利的早期链终止，明显提高了偶联产率。

上述目标可通过权利要求1所述的方法得以实现。采用权利要求1所述的方法时衍生得到的化合物同样是本发明的目标。

申请人发现了由式I的化合物起始的肽合成方法

其中A为固相支持物或嫁接至固相支持物的接头；n为0和10之间的整数；X是C_1-6烷氧基，芳基取代的C_1-6烷氧基，芳氧基，烯丙氧基，可选地保护的氨基酸残基，可选地保护的肽残基或NR¹R²，其中R¹和R²独立地为氢或C_1-10烷基；且Y是与A和该氨基官能团之间的键正交的保护基团；并包含如下步骤