[发明专利]血红蛋白类的测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及使用电泳法的血红蛋白类的测定方法，特别涉及能以高精 度测定稳定型血红蛋白A1c的血红蛋白类的测定方法、以及同时测定稳定 型血红蛋白A1c和异常血红蛋白类的方法。

背景技术

血红蛋白(以下也称为Hb)类、其中作为糖化血红蛋白类之一种的 血红蛋白A1c(以下也称为HbA1c)由于反映过去1～2个月期间血液中 的平均糖浓度，所以广泛用作用于糖尿病的筛选检测和掌握糖尿病患者的 血糖管理状态的检测项目。

目前，HbA1c的测定通过HPLC法、免疫法、电泳法等进行。其中， 在临床检测领域中普遍采用的HPLC法中，每1种试样的测定可能为1～2 分钟，另外能够实现批内重现性试验(within-run reproducibility)的CV值 为1.0％左右的测定精度。作为用于掌握糖尿病患者的血糖管理状态的测 定方法，需要这样水平的性能。

相对于此，电泳法由于装置结构简便，所以是能制作微芯片电泳装置 之类的廉价且小型的系统的技术，可以期待电泳法的HbA1c的高精度测 定技术适用于临床检测在成本方面具有非常有益的效果。

自古以来，基于电泳法的Hb类的测定用作具有与通常不同的氨基酸 序列的异常Hb类的分离方法，但HbA1c的分离非常困难，用凝胶电泳的 方法需要30分钟以上的时间。如上所述，电泳法应用于临床检测领域时， 由于在测定时间和测定精度方面存在问题，所以目前几乎没有应用于诊断 糖尿病。

相对于此，在1990年左右提出的毛细管电泳法使高分离和高精度测 定成为可能，例如专利文献1和专利文献2中公开了通过毛细管电泳法分 离HbA1c的方法。

但是，采用专利文献1的方法时，无法消除测定时间长的问题，除此 之外，使用的缓冲液的pH高达9～12，所以Hb有可能发生变性，从而难 以将该方法应用于临床检测。

另外，专利文献2中，通过组合在该专利文献公开前就公知的2种技 术，即利用硫酸化多糖类对Hb类的亲和性以及毛细管内面的动态涂渍法 这2种技术，实现了比凝胶电泳法更短时间的测定，并且能用10分钟左 右进行测定。

但是，上述动态涂渍法在测定结束后必须在测定随后的试样时再次进 行涂渍。因此，在每次测定开始时为了处于相同的涂渍状态，必须通过测 定结束后的清洗操作剥离涂渍层，恢复至测定开始前的初始状态。即，进 行连续测定时，必须在测定期间插入清洗和涂渍操作，从而导致测定时间 延长。另外，上述清洗和涂渍操作会导致测定误差发生。除此之外，由于 在测定时必须具备涂渍用的试剂，所以于成本上也不利。另外，即使在不 进行连续测定的情况下，与HPLC法相比，10分钟左右的测定时间非常长， 对于应用于临床检测是不充分的。

进而，进行糖尿病诊断时，必须将HbA1c成分中、特别是成为糖尿 病指标的稳定型HbA1c从不稳定型HbA1c或氨基甲酰化Hb等妨碍测定 的成分(以下也将它们称为修饰Hb类)中分离。但是，由专利文献1及 专利文献2中公开的方法得到的电泳图谱中，分离性能和测定精度不充分， 在上述方法的技术范围内难以从修饰Hb类中分离出稳定型HbA1c。

另外，已知一部分试样中所含的异常Hb类为溶血性贫血和地中海贫 血等来源于血红蛋白的疾病的诊断指标，在基于HPLC法的HbA1c测定 方法中，公开了同时测定稳定型HbA1c和异常Hb类的技术。但是，至今 为止，并未明确基于电泳法进行的此类技术。

【专利文献1】日本特表平09-510792号

【专利文献2】日本特开平09-105739号

发明内容

鉴于上述现状，本发明的目的在于提供使用电泳法的血红蛋白类的测 定方法，特别是能以高精度测定稳定型血红蛋白A1c的血红蛋白类的测定 方法，以及同时测定稳定型血红蛋白A1c及异常血红蛋白类的方法。

本发明人等进行了潜心研究，结果发现通过将离子性聚合物固定于泳 道，并且使用含有硫酸化多糖类的缓冲液，能以短时间、高精度地测定特 别是稳定型HbA1c，从而完成了本发明。

本发明涉及使用电泳法测定血红蛋白类的方法，涉及将离子性聚合物 固定于泳道且使用含有硫酸化多糖类的缓冲液的血红蛋白类的测定方法。

以下详细说明本发明。