[发明专利]HPV抗原融合蛋白疫苗组合物及其应用

说明书

相关申请的交叉援引

本申请要求于2006年10月19日提交的PCT申请号 PCT/CN2006/002778的优先权，该PCT申请的全部公开内容以引用的 方式被并入本文中。

发明领域

本发明总体而言涉及可用于治疗和/或预防疾病的疫苗 组合物。具体来说，本发明涉及包含突变的人乳头瘤病毒E7抗原和 免疫刺激多肽的融合多肽的疫苗组合物。

发明背景

提供如下之描述内容仅为帮助读者理解。并不承认任何 所提供的信息或引用的参考文献为本发明的现有技术。

人乳头瘤病毒(Human papillomavirus，HPV)是一组上皮 细胞特异的病毒的总称，这些病毒之间DNA限制性酶谱具有多样性， 衣壳蛋白抗原性也不同。这些病毒有相似的形状，在人和动物身上广 为传播。它们具有高度特异性，不能跨物种传播。到目前为止，已经 确定的HPV型的数目已经超过了110。根据它们的致瘤危险性大小可 分为高危型和低危型。低危型HPV，如HPV6，HPV11，HPV42，HPV43， HPV44，经常导致良性病变，例如外生殖器疣。高危型HPV，如HPV16， HPV18，HPV31，HPV33，HPV35，HPV39，HPV45，HPV51，HPV52， HPV56，HPV58，HPV59，HPV68，与宫颈癌和宫颈上皮内瘤样病变 (Cervical intraepithelial neoplasm，CIN)的发生发展相关。世界范围 内的宫颈癌组织标本研究表明HPV16和HPV18型具有最高的感染 率。在所有已经检测出来的HPV型中，HPV16导致50％，HPV18导 致14％，HPV45导致8％，HPV31导致5％，其它型导致23％的感染。 HPV病毒基因组包含三个基因区：早期基因区(E区)，晚期基因区 (L区)和非编码上游调节序列区(URR)。其中早期基因区包含六 个早期开放读码框，分别被命名为E1，E2，E4，E5，E6和E7。E6 和E7蛋白是癌蛋白，在病毒复制，致感染细胞永生化和细胞转化中 发挥重要作用(Park et a1.，Cancer 76：1902-1913(1995))。

早期基因E7编码一个分子量大约10KD的小多肽，它能 结合视网膜母细胞瘤(Retinoblastoma，Rb)基因的表达产物。Rb是一 个肿瘤抑制因子，它能结合转录因子E2F并灭活它。E2F能够调节许 多生长相关基因的转录。Rb-E2F复合物的形成能够防止这些基因在 G0和G1相的表达，并因此限制它们表达到S相。在S相，Rb-E2F 复合物被“程序化”设定要解离，以便释放出有活性的转录因子E2F。 Rb-E7复合物的形成将阻止Rb-E2F复合物的形成，并缩短S相，即 促进细胞周期进展。高致瘤性HPV型的E7蛋白与Rb的亲和力要比 非致瘤性HPV型的E7蛋白与Rb的亲和力高。

发明简述

本发明总体而言涉及HPV融合多肽的制备及其应用。具 体来说，本发明涉及刺激针对表达HPV抗原的细胞的免疫应答，以 提供预防和/或治疗性益处的疫苗的制备。

本发明一方面提供了疫苗组合物，包含免疫刺激多肽和 突变的HPV抗原的融合蛋白，其中该突变HPV抗原为包含至少两个 半胱氨酸残基替代的E7多肽。在具体实施方式中，该融合蛋白包含 选自由以下成员构成的组的序列：SEQ ID NOS：6，8，12和14。

在一些实施方式中，本发明提供了包含免疫刺激多肽和 突变的HPV抗原的融合蛋白的疫苗组合物，该融合蛋白在重组大肠 杆菌E.coli细胞中表达时是可溶的。在一个具体实施方式中，在大肠 杆菌E.coli中，包含钙网蛋白(Calreticulin)和E7多肽的HPV融合 多肽的可溶性要高于包含Hsp70和E7多肽或Hsp60和E7多肽的融合 多肽的可溶性。