[发明专利]具有提高的热稳定性、嗜热性和嗜碱性的家族6纤维素酶

权利要求书

1.经修饰的家族6纤维素酶，其由SEQ ID NO：12、SEQ ID NO： 14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18或SEQ ID NO：20组成，

其中所述经修饰的家族6纤维素酶与SEQ ID NO：1所编码的母体 家族6纤维素酶相比显示出增强的热稳定性、嗜碱性、嗜热性或其组合。

2.经修饰的家族6纤维素酶，其由SEQ ID NO：21组成，

其中所述经修饰的家族6纤维素酶与SEQ ID NO：4所编码的母体 家族6纤维素酶相比显示出增强的热稳定性、嗜碱性、嗜热性或其组合。

3.经修饰的家族6纤维素酶，其由SEQ ID NO：22组成，

其中所述经修饰的家族6纤维素酶与SEQ ID NO：7所编码的母体 家族6纤维素酶相比显示出增强的热稳定性、嗜碱性、嗜热性或其组合。

4.权利要求1至3中任一项的经修饰的家族6纤维素酶，其中所述 经修饰的家族6纤维素酶具有超出母体家族6纤维素酶的热稳定性提 高，这通过其T₅₀提高至少5℃来证明。

5.权利要求1至3中任一项的经修饰的家族6纤维素酶，其中所述 经修饰的家族6纤维素酶具有超出母体家族6纤维素酶的热稳定性提 高，这通过其T₅₀提高至少9℃来证明。

6.权利要求1至3中任一项的经修饰的家族6纤维素酶，其中所述 经修饰的家族6纤维素酶具有超出母体家族6纤维素酶的嗜热性提高， 这通过其T_opt提高至少1.5℃来证明。

7.权利要求1至3中任一项的经修饰的家族6纤维素酶，其中所述 经修饰的家族6纤维素酶具有超出母体家族6纤维素酶的嗜热性提高， 这通过其T_opt提高至少2.5℃来证明。

8.权利要求1至3中任一项的经修饰的家族6纤维素酶，其中所述 经修饰的家族6纤维素酶具有超出母体家族6纤维素酶的嗜碱性提高， 这通过其pH_opt提高至少0.5个单位来证明。

9.一种遗传构建体，其包含编码权利要求1至3中任一项中所定义 的经修饰家族6纤维素酶的DNA序列，所述DNA序列与调节其从宿主 微生物中表达和分泌的DNA序列有效连接。

10.权利要求9的遗传构建体，其中所述调节经修饰家族6纤维素 酶表达和分泌的DNA序列来源于所述宿主微生物。

11.权利要求10的遗传构建体，其中所述调节经修饰的家族6纤维 素酶表达和分泌的DNA序列来源于酵母或丝状真菌。

12.权利要求11的遗传构建体，其中所述调节经修饰的家族6纤维 素酶表达和分泌的DNA序列来源于酵母属或木霉属的物种。

13.一种经遗传修饰的微生物，其能够表达和分泌权利要求1至3 中任一项的经修饰的家族6纤维素酶，并包含权利要求9所定义的遗传 构建体。

14.权利要求13的经遗传修饰的微生物，其中所述微生物是酵母或 丝状真菌。

15.权利要求14的经遗传修饰的微生物，其中所述微生物是酵母属 (Saccharomyces)、毕赤酵母属(Pichia)、汉逊酵母属(Hansenula)、木霉 属(Trichoderma)、曲霉属(Aspergillus)、镰孢菌属(Fusarium)、腐质霉属 (Humicola)、脉孢菌属(Neurospora)或原毛平革菌属(Phanerochaete)的 物种。

16.权利要求15的经遗传修饰的微生物，其中所述微生物是里氏木 霉。

17.权利要求1至3中任一项的经修饰家族6纤维素酶用于处理纤 维素底物的用途。

18.用于生产权利要求1至3中任一项所定义的经修饰家族6纤维 素酶的方法，该方法包括：(i)用权利要求9所定义的遗传构建体转化真 菌宿主细胞，产生重组的真菌菌株；(ii)选择表达经修饰家族6纤维素酶 的重组真菌菌株；和(iii)在诱导所述经修饰家族6纤维素酶表达的条件 下，在深层液体发酵中培养所选择的重组菌株。