[发明专利]含有鲨烯的水包油乳液的质量控制方法

说明书

本文引用的所有文献通过引用全文纳入本文。

技术领域

本发明涉及疫苗佐剂生产领域，具体说，涉及含有鲨烯的水包油乳液 佐剂的质量控制测定。

背景技术

称为‘MF59’[1-3]的疫苗佐剂是鲨烯、吐温80和司盘85的亚微米水包 油乳液。它也可包含柠檬酸离子，如10mM柠檬酸钠缓冲剂。该乳液的体 积组成可以是约5％鲨烯、约0.5％聚山梨酯80和约0.5％司盘85。在参考 文献4的第10章和参考文献5的第12章更详细地描述了该佐剂。MF59中 的油滴很小，足以经0.2μm滤器过滤除菌。

因为它是给予人的佐剂(例如，它包含在FLUAD^TM疫苗中)，所以疫苗 的质量控制特别重要，必须将批次之间的变化控制在很窄的限度内。MF59 的重要参数包括乳液中的平均液滴尺寸、生物负荷(bioburden)、pH、视觉 外观和分解产物或其成分的常见污染物是否存在。

本发明的目的是为水包油乳液佐剂，如MF59的质量控制提供进一步 改进的测定。

发明内容

现在发现，测量MF59佐剂批次中鲨烯的含量可用作检查生产过程中 的问题的方式。具体说，已发现鲨烯含量下降可能表明出现过滤问题。测 试最终批次中的鲨烯含量比研究滤器的特性更容易，特别是如果滤器是保 持在GMP条件下的设备的一部分时，因此鲨烯测定简化了水包油乳液的质 量控制。

因此，本发明提供一种水包油乳液佐剂的质量控制测试方法，其中所 述佐剂含有鲨烯，所述方法包括将佐剂的实际鲨烯含量与标准鲨烯含量作 比较的步骤。如果实际的鲨烯含量与标准含量不同，则有生产故障，因此 佐剂未通过质量控制测试，然而，如果实际含量可接受，则该佐剂通过质 量控制检测且可用于疫苗生产。

本发明也提供生产水包油乳液佐剂的方法，所述方法包括以下步骤： (i)用已知量的水性载体、表面活性剂和鲨烯制备亚微米水包油乳液；(ii)对 该乳液进行过滤除菌，以提供无菌乳液；和(iii)测量该无菌乳液的鲨烯含量。 可将步骤(iii)中测定的鲨烯含量与步骤(i)中的已知鲨烯含量作比较。如果此 比较揭示出鲨烯含量明显改变，则有生产故障，因此该佐剂未通过质量控 制测试。

通常在给予患者前将乳液佐剂与抗原混合。可以在使用时临时混合(在 这种情况下抗原和佐剂分开包装)，或者可以在疫苗生产过程中、填充前混 合。在前一种情况下，对佐剂本身进行质量控制测试。在后一种情况下， 在与抗原混合前对佐剂和/或对佐剂-抗原混合物进行质量控制测试。

因此，本发明也提供一种疫苗的质量控制测试方法，所述疫苗包含含 有鲨烯的水包油乳液佐剂，所述方法包括以下步骤：(i)将佐剂的实际鲨烯 含量与标准鲨烯含量作比较；如果实际的鲨烯含量可接受，(ii)将该佐剂与 抗原混合以制备疫苗。步骤(ii)可包括单独包装佐剂和抗原，以便在使用时 混合它们，或者该步骤可包括在填充前或填充时混合它们。

相似地，本发明提供一种疫苗的质量控制测试方法，所述疫苗包含抗 原和含鲨烯的水包油乳液佐剂，所述方法包括将疫苗的实际鲨烯含量与标 准鲨烯含量作比较的步骤。如果实际的鲨烯含量与标准含量不同，则有生 产故障，因此该疫苗未通过质量控制测试，然而，如果实际含量可接受， 则该疫苗通过质量控制检测且可用于销售和/或分销。

在流感病毒疫苗的生产过程中本发明特别有用，因此本发明提供一种 方法，该方法包括混合(i)流感病毒抗原和(ii)含鲨烯的水包油乳液佐剂的步 骤，所述方法还包括以下步骤：在(a)混合步骤之前测定佐剂中的鲨烯含量， 和/或(b)在混合步骤之后测定抗原-佐剂混合物中的鲨烯含量。如上所述， 可将测定的鲨烯含量与标准鲨烯含量作比较，以检查生产故障。

测试方法

将本发明方法用于含有鲨烯的水包油乳液佐剂，该方法包括测量(i)佐 剂本身，和/或(ii)含有佐剂和抗原的混合物的疫苗组合物中的鲨烯含量。

本领域已知各种鲨烯实验。例如，参考文献6公开了鲨烯的定量比色 测定法。参考文献7公开了在游离脂肪酸、游离固醇和酰基甘油分子物质 存在下定量测定鲨烯的高温气相色谱火焰电离检测法。参考文献8公开了 利用带紫外检测的高效液相色谱的验证实验，检测限为每10亿份140份。 参考文献9公开了超临界流体色谱在鲨烯定量分析中的应用。

参考文献10公开了用于测定鲨烯的激光解吸/电离飞行时间质谱法。