[发明专利]作为疟疾疫苗的恶性疟原虫表面蛋白的偶联物

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求2006年10月16日递交的美国临时申请No.60/851,961的利 益，该申请以其整体而将其公开的内容明确地结合于此。

技术领域

本发明提供了动合子表面蛋白Pfs25的偶联物，该动合子表面蛋白Pfs25 的偶联物作为抵抗引发最严重形式的疟疾的恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)的疫苗是有效的。本发明还提供了用作抵抗间日疟原虫 (Plasmodium vivax)的疫苗的动合子表面蛋白Pvs25的偶联物。并提供了制 备偶联物的方法，该偶联物含有通过连接基团(linking group)结合到自身或 者结合到其它蛋白质上的动合子表面蛋白。

背景技术

疫苗抵抗疟疾的一种途径就是阻断寄生虫从蚊向人类的传播。当抵抗有性 的蚊阶段特异性的表面抗原的抗体被蚊从血餐(blood meal)中摄入时，所述 抗体能阻断寄生虫在该媒介中的发育(卡特，R.等人2000自然医学6：241-244 (Carter，R.et al.2000 Nat Med 6：241-244))。已经确定了四种蛋白质作为传播 阻断抗体(transmission-blocking antibodies)的潜在诱导物(威廉姆森，KC.等 人1993生虫学杂志58：355-358(Williamson，KC.et al.1993 Mol Biochem Parasitol 58：355-358)；卡特，R.等人1990寄生虫免疫学12：587-603(Carter，R. et al.1990 Parasite Immmunol 12：587-603)；卡斯罗，DC.等人1998自然 333：74-76(Kaslow，DC.et al.1998 Nature 333：74-76)；达菲，PE.等人1993实 验医学177：505-510(Duffy，PE.et al.1993J Exp Med 177：505-510))。上述中 的两种在配子表面上和胞内配子母细胞内表达。另外两种是在蚊阶段的感染过 程中专有地表达于接合子和动合子表面的表观分子量为25kDa的恶性疟原虫 表面蛋白(Pfs25)和表观分子量为28kDa的恶性疟原虫表面蛋白(Pfs28)。 感染了疟疾并生活在地方性疾病国家(endemic countries)的人中没有显示出 对这两种蛋白质的进行应答的抗体(卡特，R.等人1989实验医学169：135-147 (Carter，R.et al.1989 J Exp Med 169：135-147))。世界各地的Pfs25的氨基酸 序列中表现出极小的变化(卡斯罗，DC.等人1989生虫学杂志32：101-104 (Kaslow，DC.et al.1989 MoI Biochem Parasitol 32：101-104))。这种很可能是由 于在人宿主中内没有遭受免疫压力(immune pressure)而导致的相对的同次性 (homogeneity)，使得Pfs25成为用于疟疾传播阻断疫苗的具有吸引力的候选 (巴尔，PJ.等人1991实验医学174：1203-1208(Barr，PJ.et al.1991 J Exp Med 174：1203-1208))。然而，即使施用了佐剂，Pfs25在小鼠和人内的免疫原性也 很差(科万，C.等人2004感染与免疫72：584-588(Coban，C.et al.2004 Infect Immum 72：584-588)；卡斯罗，DC.等人2002化学免疫学80：287-307(Kaslow， DC.2002 Chem Immunol 80：287-307))。通过其它蛋白获得了蛋白质-蛋白质偶 联物的免疫原性的增加。细胞色素c的聚合物制剂在动物中的免疫原性比在相 应的单体蛋白质中更高(赖希林，M.等人1970生物化学杂志245：947-954 (Reichlin，M.et al.1970 J Biol Chem 245：947-954))，并且流感病毒血凝素-白 喉类毒素(influenza hemagglutinin-diphtheria toxoid)偶联物疫苗比单独的血凝 素对流感病毒感染更具有抵抗性(格拉文施泰因，S.等人1994美国老年医学杂 志42：245-251(Gravenstein，S.et al.1994 J Am Geriat Soc 42：245-251))。也已 经对含有金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)型的偶联物(5个和8个荚 膜多糖通过己二酸二酰肼(adipic acid dihydrazide)或N-琥珀酰亚胺基-3-(-2- 吡啶基二硫代基)丙酸酯(N-succinimidyl-3-(2-pyridyldithio)propionate)和其它 的连接基团而结合到载体蛋白上)进行了研究(法桐，A.等人1992感染与免 疫60：584-589(Fattom，A.et al.1992 Infect Immun 60：584-589)；科萨克兹卡，Z. 等人1999感染与免疫67：5806-5810(Kossaczka，Z.et al.1999 Infect Immun 67：5806-5810)；斯奇尔松等人实验医学1980 152：361-76(Schneerson et al J Exp Med 1980，152：361-76))。已经用昆虫媒介(insect vector)证实了对人病 原体的抗体介导的转播阻断。由螺旋体外膜蛋白A(OspA)疫苗诱导的对包 柔式伯氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi)的抗体在硬蜱属蜱(Ixodes ticks)的 肠内被活化(德席尔瓦，AM.等人1997感染与免疫65：3146-3150(DeSilva，AM. et al.1997 Infect Immun 65：3146-3150))。显示所述OspA蛋白在寄生虫的载体 阶段得到最大的表达，这意味着该疫苗诱导了传播阻断活性。