[发明专利]重组宿主细胞中的脱氧核糖核酸酶表达

权利要求书

1.一种芽孢杆菌属细胞，其产生至少一种目的多肽并表达一种或更多重 组核酸酶编码基因从而产生核酸酶，其中所述多肽分泌到营养培养基中，并 且核酸酶是胞外核酸酶，其中所述重组核酸酶编码基因与地衣芽孢杆菌或枯 草芽孢杆菌的pstS启动子可操作地连接。

2.根据权利要求1的细胞，其为嗜碱芽孢杆菌(Bacillus alkalophilus)、 解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、短芽孢杆菌(Bacillus brevis)、环 状芽孢杆菌(Bacillus circulans)、克劳氏芽孢杆菌(Bacillus clausii)凝结芽孢 杆菌(Bacillus coagulans)、灿烂芽孢杆菌(Bacillus lautus)、迟缓芽孢杆菌 (Bacillus lentus)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、巨大芽孢杆菌(Bacillus  megaterium)、嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)、枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis)或苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)细胞。

3.根据权利要求1或2的细胞，其中所述至少一种目的多肽包含酶。

4.根据权利要求3的细胞，其中所述酶是裂合酶、连接酶、水解酶、氧 化还原酶、转移酶或异构酶。

5.根据权利要求1或2的细胞，其中所述一种或多种重组核酸酶编码基因 由经调节的启动子转录，该启动子在所述细胞的标准补料分批发酵过程中上调 至少10％。

6.根据权利要求5的细胞，其中所述启动子响应生长培养基中的物质限制 而上调。

7.根据权利要求6的细胞，其中所述启动子响应生长培养基中的磷酸盐 限制而上调。

8.产生基本不含污染DNA的目的多肽的方法，所述方法包含步骤：

(a)培养产生至少一种目的多肽并表达一种或多种重组核酸酶编码基因 从而产生核酸酶的芽孢杆菌属细胞，其中所述多肽分泌到营养培养基中，并 且核酸酶为胞外核酸酶；和

(b)分离目的多肽，

其中所述重组核酸酶编码基因与地衣芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌的pstS 启动子可操作地连接。

9.根据权利要求8的方法，其中所述细胞是嗜碱芽孢杆菌、解淀粉芽孢 杆菌、短芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、灿烂 芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆 菌、枯草芽孢杆菌或苏云金芽孢杆菌细胞。

10.根据权利要求8或9的方法，其中所述至少一种目的多肽包含酶。

11.根据权利要求10的方法，其中所述酶是裂合酶、连接酶、水解酶、 氧化还原酶、转移酶或异构酶。

12.根据权利要求8或9的方法，其中将所述一种或多种重组核酸酶编 码基因整合入所述细胞的基因组中。

13.根据权利要求8或9的方法，其中所述一种或多种重组核酸酶编码 基因由经调节的启动子转录，所述启动子在所述细胞的标准补料分批发酵过 程中上调至少10％。

14.根据权利要求13的方法，其中所述启动子响应生长培养基中的物质 限制而上调。

15.根据权利要求14的方法，其中所述启动子响应生长培养基中的磷酸 盐限制而上调。

16.根据权利要求13的方法，其中所述一种或多种重组核酸酶编码基因 由地衣芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌的pstS启动子转录。