[发明专利]血浆凝血酶调节蛋白活性功能测量的方法

权利要求书

1.体外测量凝血酶调节蛋白功能活性的方法，所述方法包括分析 来自生物样品的生物介质中，蛋白C在凝血酶辅助因子即所述凝血酶 调节蛋白存在下，通过凝血酶向激活的蛋白C(PCa)的激活，所述方法 包括向所述血浆样品中加入所述蛋白C系统激活所需的试剂、加入纯 化的蛋白C以及还加入纤维蛋白聚合抑制剂。

2.如权利要求1所述的体外测量凝血酶调节蛋白功能活性的方 法，其中所分析的凝血酶调节蛋白是血浆凝血酶调节蛋白，所述生物 样品是血浆样品，所述分析在血浆介质中进行。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中为了所述激活蛋白C系统， 加入凝血酶和钙离子。

4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中利用酶促底物测定 所述激活的蛋白C的活性。

5.如权利要求4所述的方法，其中利用PCa的生色或荧光测定底 物，分析所述激活的蛋白C的酰胺水解活性。

6.如权利要求5所述的方法，其中分析由合成的底物CBS 42.46 释放的对-硝基苯胺。

7.如权利要求4所述方法，其中分析凝集的血浆蛋白，例如因子 Va、因子VIIIa或TAFIa，对所述凝集的血浆蛋白的抑制依赖PCa。

8.如权利要求2-7中任一项所述的方法，包括下列步骤：

a)使血浆样品与试剂1接触，所述试剂1含有能够激活所述蛋白 C系统的介质所含的凝血酶，特别地含有钙离子，所述试剂1还含有 纤维蛋白聚合抑制剂；

b)将步骤a)中得到的介质与含有纯化的蛋白C的试剂2孵育足以 允许所述蛋白C激活为PCa的时段，所述激活借助与辅助因子、即包 含在所述血浆样品中的凝血酶调节蛋白复合的凝血酶；

c)使步骤b)中得到的含有激活的蛋白C的介质与PCa的酶促底 物接触；

d)检测所述PCa底物的转化。

9.如权利要求2-8中任一项所述的方法，其中稀释所述血浆样品， 例如稀释1/3。

10.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述纤维蛋白聚 合抑制剂是多肽抑制剂，例如H-GlyProArgPro-OH.AcOH(GPRP.Ac- OH)。

11.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述纤维蛋白聚合 抑制剂是抗纤维蛋白原抗体。

12.如权利要求8-11中任一项所述的方法，其中凝血酶缓冲液主 要含有下列化合物：

NaCl(0.15mmol/L)、Tris(20mmol/L)、CaCl₂(2.5mmol/L)、BSA (5mg/ml)；以及当所述血浆样品具有用肝素治疗的患者的特征时，还 含有肝素抑制剂，如聚凝胺(10g/l)。

13.如权利要求10或12任一项所述的方法，其中根据对所述血 浆样品的稀释，加入浓度为1-15g/l的所述纤维蛋白聚合抑制剂 GPRP.AcOH。

14.如权利要求8-13中任一项所述的方法，其中所述激活的蛋白 C的所述酶促底物是寡肽THC-Pro-Arg-pNa。

15.如权利要求4-14中任一项所述的方法，其中通过记录光密度， 进行所述PCa酶促底物转化的定量测量。