[发明专利]病毒载体及其应用

权利要求书

1.含有Semliki森林病毒(SFV)复制子的病毒载体，其中所述复制子含有(i)编码在亚基nsp2中具有突变P718T和R649H的SFV复制酶的核苷酸序列，(ii)含有选择基因的多核苷酸，以及(iii)含有编码目的异源产物的核苷酸序列的多核苷酸。

2.如权利要求1所述的病毒载体，含有SEQ ID NO：1和SEQ IDNO：2。

3.如权利要求1所述的病毒载体，含有：

a)含有编码目的异源产物的核苷酸序列的多核苷酸，其表达受第一SFV亚基因组启动子(SG1)的控制；以及

b)含有选择基因的多核苷酸，其表达受第二SFV亚基因组启动子(SG2)的控制。

4.如权利要求3所述的病毒载体，其中所述第一和第二SFV亚基因组启动子是相同的。

5.如权利要求3所述的病毒载体，其中所述第一和第二SFV亚基因组启动子是不同的。

6.如权利要求1所述的病毒载体，含有处于亚基因组启动子下游的构建体，所述构建体包含所述含有选择基因的多核苷酸和所述含有编码目的异源产物的核苷酸序列的多核苷酸，上述多核苷酸协调地融合。

7.如权利要求6所述的病毒载体，其中所述含有选择基因的多核苷酸通过多核苷酸连接子与所述含有编码目的异源产物的核苷酸序列的多核苷酸协调地融合。

8.如权利要求7所述的病毒载体，其中所述连接子是含有编码翻译后蛋白水解切割位点的核苷酸序列的多核苷酸。

9.如权利要求8所述的病毒载体，其中所述连接子是含有编码蛋白酶的核苷酸序列的多核苷酸，所述蛋白酶在由所述选择基因的翻译和所述编码目的异源产物的核苷酸序列的翻译产生的蛋白间发挥顺式作用。

10.如权利要求9所述的病毒载体，其中所述蛋白酶是口蹄疫病毒(FMDV)自身蛋白酶2A。

11.如权利要求8所述的病毒载体，其中所述连接子是含有编码反式作用蛋白酶的切割位点的核苷酸序列的多核苷酸。

12.如权利要求11所述的病毒载体，其中所述反式作用蛋白酶是烟草蚀纹病毒(ETV)蛋白酶。

13.如权利要求8所述的病毒载体，其中所述连接子是含有编码能被化学试剂识别的切割位点的核苷酸序列的多核苷酸。

14.如权利要求6所述的病毒载体，其中所述含有选择基因的多核苷酸的3’末端，与所述含有编码目的异源产物的核苷酸序列的多核苷酸的5’末端协调地融合。

15.如权利要求6所述的病毒载体，其中所述含有编码目的异源产物的核苷酸序列的多核苷酸的3’末端，与所述含有选择基因的多核苷酸的5’末端协调地融合。

16.如权利要求1所述的病毒载体，其中所述选择基因是其表达赋予抗生素抗性的基因、允许合成培养基中遗漏的必需营养素的基因或赋予用所述病毒载体转染的细胞选择优势的基因。

17.如权利要求16所述的病毒载体，其中所述选择基因是其表达赋予潮霉素抗性(hph)的基因、其表达赋予新霉素抗性(neoR)的基因或编码嘌呤霉素N-乙酰基转移酶(pac)的基因，所述编码嘌呤霉素N-乙酰基转移酶(pac)的基因的表达赋予嘌呤霉素抗性。

18.如权利要求1所述的病毒载体，其中所述目的异源产物是报道蛋白或肽；具有治疗或诊断用途的肽、蛋白或抗体或所述抗体的片段；或重组蛋白或肽。

19.如权利要求18所述的病毒载体，其中所述目的异源产物选自胰岛素样生长因子I(IGF-I)、心脏营养素-1、制瘤素M(OSM)、α干扰素、双调蛋白(AR)、神经胶质细胞衍生的神经营养因子(GDNF)、内皮细胞蛋白C/激活的蛋白C受体(EPCR)和目的或者治疗或诊断用途的抗体或其功能片段。

20.如权利要求1-19中任一项所述的病毒载体在体外产生可组成型地表达目的异源产物的稳定细胞系中的用途。

21.可组成型地表达目的异源产物的稳定细胞系，其中它是用如权利要求1-19中任一项所述的病毒载体转染的细胞系。