[发明专利]使用吸附于滤纸上的样品的筛选方法

说明书

发明领域

本发明公开了一种诊断试验和方法，其用于将血液或者另一种生物液 (biologicaifluid)或样品与试验化合物混合，并将血液点样在滤纸上以便随 后分析试验化合物对血液或液体样品的作用。

一般背景

血液是主要由血浆和细胞组成的复杂的混合物(1-3)。通过离心和其 他技术可将血浆与细胞分离。如果将血浆静置，它将通过凝固凝结成块， 从而可分离血清与血凝块。可通过加入不同的抗凝剂(包括EDTA、EGTA、 肝素、柠檬酸盐和其他剂)抑制凝固。血液的细胞包括树突细胞、巨噬细 胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞、自然杀伤细胞、 红细胞以及包括造血干细胞的各种干细胞。此外由巨核细胞产生的血小板 也大量存在。血浆含有上千种蛋白质，基本上含有人类蛋白质组的任何蛋 白(4，5)。其中一些蛋白参与运输、血液凝块或免疫防御，而其他的起 到血液细胞和组织细胞间信号分子的功能。尤其，免疫系统的细胞(树突 细胞、巨噬细胞、T细胞、B细胞、自然杀伤细胞)的活性通过信号分子 (例如，白细胞介素、趋化因子、生长因子)、组织抗原和受体的复杂网 络来调控(3，6-9)。免疫系统细胞的活性和特异性可通过几种方法和测定 来研究和定量。T细胞、B细胞和其他细胞可通过使用细胞表面标记分子 的抗体的荧光激活细胞分选术定量(10，11)。特异的T细胞可通过细胞 毒性测定、铬释放测定和细胞因子释放测定(例如ELISPOT)(12-16)以 及通过使用不同的肽-主要组织相容性复合物(MHC)蛋白构建体(construct) 来测量(17，18)。B细胞的活性可通过测定从B细胞释放的特异性抗体 的水平来测量(19，20)。

测量从血液细胞释放的信号分子中的主要问题是与定量相关的贮藏 和运输的问题。许多血液成分(例如细胞因子)是不稳定并短寿命的，导 致其在孵育、贮藏和运输期间降解。由于这一原因，比较性分析和诊断试 验必须在中心实验室的血液收集和孵育后立刻完成。理想地，所有待比较 的样品应使用校准的仪器连续分析。

这并不总是可行的，例如，当在偏远地区采集血液样品时，当进行体 外和体内时间性研究时或当比较来自大量不同个体的样品时。这一问题的 一种解决方法是在运输和贮藏时冷冻样品。然而，这一方法不能保证成分 的保存，需要巨大的冷冻、运输和贮藏容量，需要在每次进行分析时解冻、 并且容易受到电力供应短缺的损害。由于这一原因，需要血液和生物样品 保存的可靠方法，并且需要采用可靠的样品保存与样品处理结合的诊断试 验。

使用滤纸进行血液点样以用于随后的分析是众所周知的，例如用于新 生儿血液样品的遗传代谢疾病分析(21)。这样的优点是血液成分的良好 保存、容易运输和容易长期贮藏。然而在与试验化合物孵育后使用滤纸以 及类似方法来干燥和贮藏血液样品以前尚未被使用或描述过，可能因为这 被预期为不可能或不可行的。

发明概述

本发明公开了一种诊断试验和方法，其用于将血液或另一种生物液与 试验化合物混合，并将血液点样在滤纸上以便干燥、保存和随后在此后的 任何时间分析试验化合物对血液的作用。

发明的详细公开内容

本发明公开了一种诊断试验和方法，其包括将血液或另一种生物液样 品与试验化合物混合，并将血液点样在滤纸上以便随后分析试验化合物对 血液的作用。所述生物液可以是脑脊液、腹膜液(peritonealfluid)、囊液(cyst fluid)、羊膜液(amnioticfluid)、灌洗液(lavagefluid)、唾液、细胞提取液或 组织提取液。所述化合物在以下中选择：氨基酸、肽、蛋白质、糖、寡糖、 多糖、糖蛋白、脂质、脂蛋白、粘多糖、激素、类固醇、维生素、影响血 液而导致血液组成改变的低分子量合成或天然化合物，例如毒素、变应原、 自身抗原、细菌蛋白或多糖、病毒蛋白、真菌蛋白或多糖、寄生虫蛋白或 多糖、细菌脂多糖或与疾病相关的任何其他化合物。

依照本发明的诊断试验和方法分析样品的细胞因子、趋化因子和生长 因子和/或神经递质以及其他多肽和蛋白的含量，所述蛋白例如CRP、IgG、 IgA、IgM、IgD、IgE、特异性(即抗原特异性)抗体、运铁蛋白、白蛋白 和/或运甲状腺素蛋白。