[发明专利]用于测定全血中的1,5-脱水葡萄糖醇的方法以及用于所述方法的传感器芯片和测定试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及用于测定血液中受到葡萄糖和/或其衍生物干扰的1，5-脱水葡萄糖醇的方法，具体涉及电化学测定血液中的1，5-脱水葡萄糖醇的方法、用于测定的传感器芯片和包括所述传感器芯片的用于测定1，5-脱水葡萄糖醇的试剂盒，所述方法的特征在于使用全血作为样本，并且不需要血细胞分离。 

背景技术

近年来，随着饮食变得更加丰富，糖尿病患者数目也在增加。为了预防糖尿病患者的并发症，血糖水平需要保持在接近健康人的水平，血糖水平自测装置被广泛使用，使得患者可以自己在家里监测血糖水平。然而，由于血糖水平随膳食而改变，并且测定需要频繁进行，因此患者遭受沉重的负担。对于患者而言，还由于缺乏知识而难以正确解释测定值，并且严格控制血糖水平也并不容易。 

同时，由于1，5-脱水葡萄糖醇不受膳食影响并且反映糖尿病患者在过去一周内的血糖控制，因此糖尿病患者只要在家里通过“一周一次”测定就能够准确了解他们的血糖控制。1，5-脱水葡萄糖醇自测试剂盒将为患者提供极大好处，但使用血清或血浆作为样本来测定1，5-脱水葡萄糖醇的常规方法需要血细胞分离而且不适合用于自测，因为测定需要大量的样本。因此，还没有实现1，5-脱水葡萄糖醇自测试剂盒，包括使用痕量原样全血作为样本的自测试剂盒。 

专利文献1至9中所述的1，5-脱水葡萄糖醇测定方法使用血清或血浆而不是全血作为样本，并且不涉及电化学测定。 

此外，当将全血样本用于由和光纯药工业株式会社(Wako PureChemical Industries，Ltd.)销售的动物用1，5AG试剂盒(日本化药株式会社(Nippon Kayaku Co.，Ltd.))时，通过添加净化水或10mM乙二胺四乙酸(EDTA)水溶液将血液溶解，再离心分离，用柱处理上清液，并通过使用色素的比色法测定1，5-脱水葡萄糖醇。换句话说，这种方法不是在不分离血细胞的情况下使用原样全血作为样本以电化学测定1，5-脱水葡萄糖醇的方法。 

通常使用血清或血浆而不是全血作为样本的原因在于血细胞中还包含葡萄糖。即使当将用于消除或转化葡萄糖的试剂添加到全血中时，葡萄糖仍保留在血细胞中而未消除或转化。由于葡萄糖在测定血液中的1，5-脱水葡萄糖醇的步骤中通过细胞膜释放，因此不能完全消除葡萄糖的干扰。在用于检测血液中的1，5-脱水葡萄糖醇的反应中，预期会受到具有氧化-还原能力的红细胞中血色素的干扰。到目前为止，通过预先酶促消除或转化葡萄糖而不分离血细胞，使用全血测定血液1，5-脱水葡萄糖醇的方法是未知的。 

此外，电化学测定1，5-脱水葡萄糖醇的方法描述于非专利文献1及专利文献10和11中。然而，非专利文献1描述了使用由过氧化氢电极和酶固定膜组成的酶传感器测定尿中的1，5-脱水葡萄糖醇的方法。然而，没有提及在共存有葡萄糖等的全血中的1，5-脱水葡萄糖醇的测定。在专利文献10中，通过使用脱氢酶和吩嗪硫酸二甲酯作为电子受体的电流分析法测定1，5-脱水葡萄糖醇。然而，只提到了1，5-脱水葡萄糖醇的参比标准的例子，但没有关于在全血中测定的描述。在专利文献11中，使具有氧化1，5-脱水葡萄糖醇的能力的酶发挥作用，并使用过氧化氢电极电化学测定所产生的过氧化氢。然而，该测定中也使用血清，这不是使用全血的测定方法。 

同时，1，5-脱水葡萄糖醇是作为在1位的还原葡萄糖的化合物并具 有与葡萄糖极为相似的化学结构。因此，用于测定1，5-脱水葡萄糖醇的许多酶也与葡萄糖反应。血液包含比1，5-脱水葡萄糖醇高20倍或更多的葡萄糖。因此，要测定1，5-脱水葡萄糖醇，必须通过某种方式消除或转化葡萄糖，以使葡萄糖不应与用于测定1，5-脱水葡萄糖醇的酶反应。此外，当通过该转化产生的葡萄糖衍生物与用于测定1，5-脱水葡萄糖醇的酶反应时，这些衍生物也必须被消除或转化。