[发明专利]一种从麝鼠香中制备具有抗血栓形成活性的物质的方法以及由该方法获得的物质

权利要求书

1、一种从麝鼠香中制备抗血栓形成剂的方法，其包括下列步骤

用选自乙醇、甲醇、己烷和乙酸乙酯的有机溶剂处理麝鼠香，进行振摇提取，离心有机溶剂提取物，获得上清液(第1步)；

对上清液进行第1次正相柱层析，获得各级分(第2步)；

对各级分进行薄层层析以确定其物质图谱，并且将其分组(第3步)；

测量所划分的各组的凝血酶时间，并且选择显示最强抗血栓形成活性的一组(第4步)；

对所选择的组进行第2次正相柱层析，获得各级分(第5步)；

对各级分进行薄层层析以确定其物质图谱，并且将其分组(第6步)；

测量所划分的各组的凝血酶时间，并且选择显示最强抗血栓形成活性的一组(第7步)；

对所选择的组进行第3次反相柱层析，获得各级分(第8步)；

对各级分进行反相薄层层析以确定其物质图谱，并且将其分组(第9步)；以及

测量所划分的各组的凝血酶时间，并且选择显示最强抗血栓形成活性的一组(第10步)。

2、权利要求1的方法，其中第1步振摇提取中，每100重量份的麝鼠香使用10至20重量份的有机溶剂。

3、权利要求1的方法，其中第1步中的振摇提取以150至200rpm振摇20至24小时。

4、权利要求1的方法，其中第1步中的离心以8,000至20,000rmp离心10至20分钟。

5、权利要求1的方法，其中离心后的残渣再用与之前振摇提取步骤所用的相同的溶剂进行处理，然后离心提取物，获得上清液，与之前提取步骤中制备的上清液一起用于第2步骤。

6、权利要求1的方法，其中第2步中第1次正相柱层析采用正相硅胶(230至400目)，并且作为流动相的有机溶剂组合选自己烷和乙酸乙酯、己烷和氯仿、己烷和丙酮、己烷和乙腈、乙酸乙酯和乙醇、或乙酸乙酯和甲醇，其中所述溶剂的组合比例由400∶1增至1∶1。

7、权利要求1的方法，其中第3和6步中用于薄层层析的展开剂为10∶1至10∶2的己烷∶乙醚，或3∶1至3∶2的己烷∶乙酸乙酯。

8、权利要求1的方法，其中第9步中用于薄层层析的展开剂为40∶1至60∶1的乙腈∶水，或1∶1至2∶1的乙酸乙酯∶甲醇。

9、权利要求1的方法，其中第3、6和9步中各级分的物质图谱的形成通过下列三个步骤进行

a)将各级分暴露于短波长(254nm)灯和长波长(365nm)紫外灯，鉴别物质图谱；

b)用10％硫酸处理薄层层析板，加热以显示着色的点，再一次鉴别物质图谱；以及

c)根据步骤a)和b)所鉴别的图谱，将具有相似移动距离的物质分组。

10、权利要求1的方法，其中第4、7或10步中的凝血酶时间是通过计数加入Thrombitimer2产品的凝血酶和纤维蛋白原后直至形成纤维蛋白原凝块的时间测量的。

11、权利要求1的方法，其中第5步第2次正相柱层析采用正相硅胶(230至400目)，并且作为流动相的有机溶剂组合选自己烷和乙酸乙酯、己烷和氯仿、己烷和丙酮、己烷和乙腈、乙酸乙酯和乙醇、或乙酸乙酯和甲醇，其中所述溶剂的组合比例由70∶1增至1∶1。

12、权利要求1的方法，其中第8步反相柱层析采用反相硅胶(63至212口)，并且作为流动相的溶剂组合由选自乙腈、甲醇、乙醇和丙酮的有机溶剂与水组成，其中所述溶剂的组合比例由20∶1增至1∶1。

13、一种根据权利要求1至12任一项方法制备的抗血栓形成剂，其中该抗血栓形成剂具有大于40秒的凝血酶时间。

14、一种包含权利要求13的抗血栓形成剂的用于治疗血栓形成的组合物。