[发明专利]具有改善并稳定化的活性的固定化界面酶

权利要求书

1.一种制备固定于不溶性多孔载体上的界面酶的方法，所述方法包 括下列步骤：

(a)提供由水性缓冲溶液和至少一种第一有机溶剂组成的双相体系， 所述第一有机溶剂是能够在与水混合时形成双相的疏水性溶剂，其中， 所述第一有机溶剂选自烷类、醇类、醛类和酮类以及它们的至少两种的 任何混合物；

(b)将所述界面酶与步骤(a)所提供的双相体系混合；

(c)将所述载体加入到步骤(b)的混合物中并进行混合；

(d)从步骤(c)所获得的混合物中分离出固定在所述载体上的界面 酶；

其中，在将所述载体加入到步骤(b)中获得的酶双相溶液之前，将所 述载体用溶于第二有机溶剂中的表面活性剂处理，并在所述处理后将该 溶剂蒸发，从而获得均匀地覆盖有表面活性剂的载体，所述第二有机溶 剂是能够使所述表面活性剂溶解的有机溶剂，所述第二有机溶剂选自烷 类、醚类、酮类和醇类以及它们的至少两种的任何混合物，并且

其中，所述界面酶是脂肪酶或磷脂酶。

2.一种制备固定于不溶性多孔载体上的界面酶的方法，所述方法包 括下列步骤：

(a)提供由水性缓冲溶液和至少一种第一有机溶剂组成的双相体系， 所述第一有机溶剂是能够在与水混合时形成双相的疏水性溶剂，其中， 所述第一有机溶剂选自烷类、醇类、醛类和酮类以及它们的至少两种的 任何混合物；

(b)将所述界面酶与步骤(a)所提供的双相体系混合；

(c)将所述载体加入到步骤(b)的混合物中并进行混合；

(d)从步骤(c)所获得的混合物中分离出固定在所述载体上的界面 酶；

其中，在将所述载体加入到步骤(b)中获得的酶双相溶液之前，将所 述载体用溶于第二有机溶剂中的表面活性剂处理，并在所述处理后将该 溶剂蒸发，从而获得均匀地覆盖有单层表面活性剂的载体，所述第二有 机溶剂是能够使所述表面活性剂溶解的有机溶剂，所述第二有机溶剂选 自烷类、醚类、酮类和醇类以及它们的至少两种的任何混合物，并且

其中，所述界面酶是脂肪酶或磷脂酶。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中，必要时将所述载体洗涤以 除去盐和有机物质，然后用所述表面活性剂处理。

4.如权利要求1或2所述的方法，其中，所述不溶性多孔载体能够 通过吸附或通过与官能团的共价结合来与所述酶结合。

5.如权利要求4所述的方法，其中，所述多孔载体是有机多孔载体 或无机多孔载体。

6.如权利要求5所述的方法，其中，所述无机多孔载体是二氧化硅 或氧化铝类载体。

7.如权利要求5所述的方法，其中，所述有机多孔载体是聚合物类 载体。

8.如权利要求5～7中任一项所述的方法，其中，所述载体含有选 自环氧基、醛基和离子基团的活性官能团。

9.如权利要求1或2所述的方法，其中，所述表面活性剂选自糖脂 肪酸酯、聚氧乙烯糖脂肪酸酯或醚、中链或长链烷基糖苷、磷脂、聚乙 二醇衍生物和季铵盐。

10.如权利要求1或2所述的方法，其中，所述酶源自南极假丝酵 母(Candida antarctica)、皱褶假丝酵母(Candida rugosa)、米黑根毛霉 (Rhizomucor miehei)、假单胞菌(Pseudomonas sp.)、雪白根霉(Rhizopus  niveus)、爪哇毛霉(Mucor javanicus)、米根霉(Rhizopus oryzae)、黑曲霉 (Aspergillus niger)、卡门柏青霉(Penicillium camembertii)、产碱杆菌 (Alcaligenes sp.)、伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.)、疏绵状嗜热丝孢菌 (Thermomyces lanuginosa)、粘稠色杆菌(Chromobacterium viscosum)、木瓜 籽和胰酶中的任何一种。