[发明专利]聚乙二醇修饰的干扰素α2a及其制备方法和应用

说明书

发明领域

本发明涉及Y型分支的聚乙二醇单位点修饰的干扰素α2a及其制备 方法，以及获得的单位点聚乙二醇化干扰素α2a在制药领域中的应用。

发明背景

干扰素(interferon，IFN)是真核细胞针对病毒感染和其它抗原刺激而 产生的一类小分子蛋白质或糖蛋白，具有广谱抗病毒、抗增殖和免疫调 节作用。干扰素已被广泛应用于多种疾病的治疗，如乙型肝炎、丙型肝 炎和HIV等病毒性感染，多发性硬化、关节炎、哮喘、胆囊纤维化和间 质性肺病等炎症反应异常性疾病，骨髓瘤、淋巴瘤、肝癌、肺癌和毛状 细胞白血病等肿瘤等疾病(Kenji Oritani，Paul W Kincade，et al.Type I  interferon and limitin：a comparison of structures，receptors，and functions. Cytokine and Growth Factor Reviews，12，337-348，2001；Yu-Sen Wang， Stephen Youngster，et al.Structural and biological characterization of  pegylated recombinant interferon alpha-2b and its therapeutic implications. Advance Drug Delivery Reviews，54，547-570，2002)。

根据化学、免疫学和生物学性质的不同，干扰素被分为4类：干扰 素α、β、γ和ε。干扰素α由白细胞分泌产生。人干扰素α由约20个基 因组成的多基因家族编码，编码蛋白质的氨基酸序列具有高达约90％的 同源性(Henco K.，Brosius F.J.，et al.J.Mol.Biol.，185，227-260，1985)。人 干扰素α2a是人干扰素α家族α2亚族的亚型之一，是一种具有多种生物 学活性的单链蛋白。该蛋白单链由165个氨基酸残基组成，如SEQ ID NO：1所示，N-端氨基酸为Cys，有1个游离α-NH₂；氨基酸序列之第23、 31、49、70、83、112、121、131、133、134和164位为Lys，均有1个 游离ε-NH₂。

干扰素用于临床治疗时，通常为胃肠外给药。由于体内药代半衰期 短(2-4h)、免疫原性强，导致给药间隔短、给药频度高，并且由于抗体 的生成使疗效显著降低，因此目前还难以达到理想的临床疗效。近年来 发展的聚乙二醇(PEG)修饰技术为克服上述问题提供了一种可能的选 择。

聚乙二醇是一种惰性、无毒、可生物降解的有机多聚物，在生物技 术和制药领域有重要用途。PEG修饰技术是通过共价结合将PEG连接到 活性蛋白上。蛋白质药物经PEG化后，其性状有显著改善，具体包括药 代半衰期延长、免疫原性降低、安全性提高、疗效增强、给药频度降低、 药物可溶性和水溶性提高、蛋白酶酶解抗性增强、方便药物的控释等。 具体可见Inada等(Inada et al.J.Bioact.and Compatible Polymers，5，343， 1990)、Delgado等(Delgado et al.Critical Reviews in Therapeutic Drug  Carrier Systems，9，249，1992)、Katre等(Katre.Advanced Drug Delivery  Systems，10，91，1993)和Davis等(美国专利UP 4179337)的报道。

美国专利第4179337号披露，PEG与酶和胰岛素结合后，蛋白质的 免疫原性降低的同时蛋白质的活性明显下降。这种效应在G-CSF (Satake-Ishikawa et al.Cell Structure and Function，17，157-160，1992)、 IL-2(Katre et al.Proc.Natl.Acad.Sci.USA，84，1487，1987)、TNF-α(Tsutsumi  et al.Jpn.J.Cancer Res.，85，9，1994)、IL-6(Inoue et al.J.Lab.Clin.Med.， 124，529，1994)和CD4-IgG(Chamow et al.Bioconj.Chem.，5，133， 1994)中均有发现。